[发明专利]一种分步酶解法水解甲鱼蛋制备高抗氧化活性肽液的方法

说明书

本发明公开了一种分步酶解法水解甲鱼蛋制备高抗氧化活性肽液的方法。该方法包括清洗、杀菌、干燥、检蛋、碎蛋（同时调整蛋白浓度）、去蛋壳、去抑制剂（超声波或热处理）、分步酶解、消毒（钝化）、灌装等步骤。通过本方法制得的肽类混合液由于具有抗氧化能力以及热稳定性，可应用于化妆品、保健品、食品加工等领域。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种分步酶解法水解甲鱼蛋制备高抗氧化活性肽液的方法。

背景技术

甲鱼是一种珍贵的水生经济动物，具有补血、强骨、益智、抗疲劳、延年益寿等功效。甲鱼的养殖在中国由来已经，并且发展迅速，具有极高的经济价值。甲鱼养殖企业一般工作程序是这样的：5-8月份，甲鱼开始产卵，甲鱼蛋产生后就进行选择，以区分受精卵与未受精卵。受精卵继续孵化，直至孵化出甲鱼苗，出售甲鱼苗或继续养殖长大出售成品。而未受精的甲鱼卵一般作为食品原料加工或丢弃，造成了一定的资源浪费。

人体的正常生理代谢会产生一些活性氧自由基，抗氧化性活性肽可以通过向自由基提供质子或电子来抑制自由基链式反应进行、清除自由基、抑制脂质过氧化，或鳌合金属离子等不同途径来发挥抗氧化作用。

随着现代生物学的发展，越来越多的人利用生物酶解技术酶解蛋白质，从而获得许多具有生理功能的生物活性多肽，增加原有蛋白质中没有的生物学功能，具有很高的经济价值。

酶解过程中可将折叠的蛋白质侧链展开，促使蛋白质内部的疏水性基团和更多的活性氨基酸侧链暴露出来，增强其疏水性，近而促使其表现出更强的抗氧化活性。生物酶解技术在甲鱼蛋白的水解方面也有一些研究，例如徐怀德等人对甲鱼蛋白进行酶水解得到了抗氧化活性肽。但是未见有人对甲鱼蛋进行酶解研究。

杨明毅等人申请了“一种将甲鱼蛋进行酶解法水解制备抗氧化活性液的方法”CN201510150779.X的专利，在此领域具有一定的突破性。但是该项工艺仍存在以下不足：1、未对甲鱼蛋进行清洗后消毒，而由于甲鱼蛋营养丰富，后期处理过程中，极易滋生细菌，影响后期产品的品质；2、未对用作原料的甲鱼蛋进行严格的质量筛选，未能排除部分变质甲鱼蛋对后期产品品质的影响；3、碎蛋的时候，去除了甲鱼蛋壳和蛋壳上的膜，而甲鱼蛋壳膜上含有90%以上的蛋白质，且甲鱼壳膜蛋白酶解后的抗氧化性极强，造成了一定程度的浪费；4、未去除甲鱼蛋中原有的类卵粘蛋白、卵抑制物、半胱氨酸蛋白酶抑制物和卵固蛋白等蛋白酶抑制剂的负面作用，使得蛋白酶的用量高、水解效率低；5、工艺中涉及酶解前的稀释和酶解后的浓缩，对资源造成了一定程度的浪费，加大了生产成本；6、所选用的酶并未充分考虑到相互之间的配合，未达到最优的水解率和最高的抗氧化性； 7、酶解过程中，所使用的4种酶在同一温度、PH值下作用，并未达到各种酶的最佳作用条件，效率不高；8、最后用3KD、10KD和50KD的分子膜过滤，得到了三种不同分子量的酶解液I（＜3KD）、II（3～5KD）和III（＞3KD），而分子膜的成本较高，使得终产物的成本偏高。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种分步酶解法水解甲鱼蛋制备高抗氧化活性肽液的方法。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述分步酶解法水解甲鱼蛋制备高抗氧化活性肽液的方法包括如下步骤：

（1）对甲鱼蛋进行清洗、杀菌和干燥，得到无菌甲鱼蛋；

（2）用验光机对无菌甲鱼蛋进行光照挑选，除去变质的甲鱼蛋，得到新鲜的甲鱼蛋；

（3）将选好的甲鱼蛋放入搅拌机，注入2～10倍甲鱼蛋体积的无菌去离子水，搅拌时间为5～25min，搅拌速度200～800r/min；

（4）碟片式离心机离心，转速3000～6000rpm，时间10～20min，去除上层的的少量油脂和底层的甲鱼蛋壳，得到中层的甲鱼蛋膜、蛋清、蛋黄混合液（即甲鱼蛋混合液）；