[发明专利]抗菌肽衍生物及其用途

说明书

本发明属于生物医药领域，主要涉及抗菌肽衍生物及其用途，尤其是疏水化修饰的抗菌肽DP7衍生物及其用途。本发明所要解决的技术问题是提供了一种疏水化修饰的抗菌肽，所述的疏水化修饰为在抗菌肽的氮末端偶联疏水片段。本发明还提供了上述疏水化修饰的抗菌肽制备得到的胶束、上述疏水化修饰的抗菌肽和上述胶束在制备抗菌药物、制备核酸转运载体、制备免疫佐剂等方面的用途。本发明涉及的抗菌肽分子量小，可以方便的使用Fmoc固相多肽合成法合成，与疏水片段经化学合成偶联方法简单易行。

技术领域

本发明属于生物医药领域，主要涉及抗菌肽衍生物及其用途，尤其是疏水化修饰的抗菌肽DP7衍生物及其用途。

背景技术

抗菌肽，又称为宿主防御肽(Host Defense Peptides,HDPs)，一般由l2到100个氨基酸残基组成，是一类碱性多肽，绝大部分的抗菌肽带正电荷。抗菌肽具有广谱的抗菌作用，能有效地抑制杀伤真菌、病毒、寄生虫等病原体，并能选择性的杀伤肿瘤细胞，不易产生耐药性，构成宿主防御病原微生物入侵的第一道屏障，是机体免疫系统的重要成分，抗菌肽已成为替代抗生素预防和控制疾病的潜在药物，且具有广阔的开发前景。尽管抗菌肽有巨大的应用潜力，但只有极少的抗菌肽在临床上广泛使用，主要原因是它的稳定性和毒性。一些研究表明，抗菌肽纳米化可以使其获得较好稳定性及减少毒性，这为抗菌肽的应用提供一个新研究方向。

抗菌肽或HDPs的免疫调节活性受到越来越多的关注，包括通过改变信号通路诱导细胞因子和趋化因子的产生、直接或间接招募效应细胞包括吞噬细胞、增强细胞内和细胞外细菌杀伤、促进树突状细胞成熟和巨噬细胞分化以及介导伤口修复、凋亡。多种抗菌肽因其良好的免疫调节作用而展现出了佐剂活性，主要方式为激活天然免疫反应和介导获得性免疫反应。

抗菌肽DP7是用计算机辅助设计新型抗菌肽的筛选方法，通过对模板抗菌肽HH2替换了2个氨基酸得到的具有更高的细菌识别特异性与更强的抗菌活性的抗菌肽(HH2的专利号：WO08022444)。经过研究表明，相较于HH2，抗菌肽DP7具有更好的抗菌活性、更低的红细胞溶血毒性及更强的免疫调节活性。在体外抗菌活性研究中，抗菌肽DP7具有很明显的细菌细胞壁的破坏作用和细胞膜的扰乱作用，从而实现抗菌的功能。在体内抗菌活性研究中，从致病性金黄色葡萄球菌感染小鼠腹腔模型研究发现，通过诱导免疫细胞清除细菌的作用，DP7表现出了非常好的治疗效果。但是高浓度DP7经静脉注射方法给药后，会导致红细胞发生溶血现象和小鼠死亡的现象出现，说明高浓度的DP7对红细胞有毒性，会破坏红细胞。DP7是带正电荷的亲水性抗菌肽，我们将其用疏水片段进行修饰可得到具有自组装成纳米粒子的两亲化合物，可大大降低静脉给药的毒性，保持其体内抗菌作用、免疫调节作用，并能作为小核酸药物的传递系统，在药物领域具有较广的用途。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的修饰的抗菌肽，以期为本领域的抗感染治疗、新型免疫佐剂的制备及siRNA运载载体制备提供一种新的有效选择。

为了解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是提供一种疏水化修饰的抗菌肽，所述的疏水化修饰为在抗菌肽的氮末端偶联疏水片段(或叫氮末端偶联疏水化合物)。所述的抗菌肽DP7的氨基酸序列为VQWRIRVAVIRK(SEQ ID No.1)。为提高稳定，DP7的碳末端一般会进行酰胺化修饰，此时其结构为VQWRIRVAVIRK-NH₂。

上述疏水化修饰的抗菌肽中，所述的疏水化合物(疏水片段)为甾醇类化合物或饱和直链脂肪酸。优选的，所述甾醇类化合物为胆固醇类化合物或胆酸类化合物。

上述疏水化修饰的抗菌肽中，所述的甾醇类化合物为丁二酰化胆固醇、胆酸或去氧胆酸。

上述疏水化修饰的抗菌肽中，所述的长链脂肪酸为C6到C20的脂肪酸。优选的，所述饱和直链脂肪酸为C8～C18中的至少一种。

上述疏水化修饰的抗菌肽中，所述的长链脂肪酸为硬脂酸(C18)、软脂酸(C16)、月桂酸(C12)或正辛酸(C8)中的至少一种。