[发明专利]五种食源性病原菌微流控芯片快速检测技术及试剂盒

权利要求书

1.一种五种食源性病原菌微流控芯片快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括扩增反应液、微流控芯片阵列、阴性对照物和阳性对照物，其中所述微流控芯片阵列设有大肠杆菌O157:H7检测芯片、金黄色葡萄球菌检测芯片、沙门氏菌检测芯片、单增李斯特菌检测芯片、副溶血弧菌检测芯片、阳性对照检测芯片、阴性对照检测芯片；所述大肠杆菌O157:H7检测芯片上设有大肠杆菌O157:H7引物组，所述金黄色葡萄球菌检测芯片上设有金黄色葡萄球菌引物组，所述沙门氏菌检测芯片上设有沙门氏菌引物组，所述单增李斯特菌检测芯片上设有单增李斯特菌引物组，所述副溶血弧菌检测芯片上设有副溶血弧菌引物组；所述阳性对照检测芯片和所述阴性对照检测芯片上同时设有大肠杆菌O157:H7引物组、金黄色葡萄球菌引物组、沙门氏菌引物组、单增李斯特菌引物组、副溶血弧菌引物组；

所述大肠杆菌O157:H7引物组由下列引物成：

正向外引物F3 GCTATACCACGTTACATTTTG

反向外引物B3 ACTACTCAACCTTCCCACCTTC

正向内引物FIP GCTCTTTAAACAGACTGCACATTCGTTGACTAAATCTTATCTGG

反向内引物BIP CTACTACAGCTGAAGCTTTACGCGAAATCCCCTTACAATTTGCC

正向环引物LF AGGTTCCGCTATTCAGCATTAAAT；

所述金黄色葡萄球菌引物组由下列引物成：

正向外引物F3 GTACGGTTACAGATAGCATG

反向外引物B3 GAAAGGCATTACGAGTTCTTGA

正向内引物FIP GTTTCATAACCTTCAGCAAGCTTTCCATACAGTCATTTTCAAGA

反向内引物BIP AAAGTCATTGCAGCTTGCTTACTTCGATCACTGGACGACG

正向环引物LF AACTCATAGTTTACAACA

反向环引物LB GTAAATTTAATGAAAGTGTTCA；

所述单增李斯特菌引物组由下列引物构成：

正向外引物F3 ACGTTTCCCCGGTTACTGT

反向外引物B3 ATTCCTTCTGAACCTTTGG

正向内引物FIP CATAATAATCGGCTTCAATCACGCTCTTTAATCTGGCATT

反向内引物BIP GCCACGTTCGGGCAATTCGTTAAAACTGGATTACCTTGACA

正向环引物LF AGACGGCTCCAACTGATCG

反向环引物LB ATAGCCTTTATTTGGGTT

所述副溶血弧菌引物组由下列引物构成：

正向外引物F3 AGCTAACCCAAAGATGATCC

反向外引物B3 GGTTGTATGAGAACCTAATTG

正向内引物

FIP ATGGACCTAAATGAAACGGAGCTCCTTTAAAAAACGAAGATGGT

反向内引物BIP ACGTCGCACGGCGTTATCCGTTTAAGAACGTAATGTCTG

正向环引物LF ACCAGTAGAAATCAATG

反向环引物LB TTAGATTTTACGAACGAGA；

所述沙门氏菌引物组由下列引物构成：

正向外引物F3 ACGTTTCCCCGGTTACTGT

反向外引物B3 ATTCCTTCTGAACCTTTGG

正向内引物FIP CATAATAATCGGCTTCAATCACGCTCTTTAATCTGGCATT

反向内引物BIP GCCACGTTCGGGCAATTCGTTAAAACTGGATTACCTTGACA

正向环引物LF AGACGGCTCCAACTGATCG

反向环引物LB ATAGCCTTTATTTGGGTT；

所述扩增反应液中包含以下成份：20mM Tris-HCl缓冲液，10mM KCL，10mM(NH4)₂SO₄，0.8M Betaine，0.001Tween 20、150μM HNB、2-6mM MgSO₄、1-1.6mM dNTPs、0.16-0.64U/μL链取代DNA聚合酶、ddH₂O。