[发明专利]一种重组α-半乳糖苷酶基因、载体、工程菌及其应用

权利要求书

1.一种重组α-半乳糖苷酶基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.一种权利要求1所述重组α-半乳糖苷酶基因编码的重组α-半乳糖苷酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。

3.一种由权利要求1所述重组α-半乳糖苷酶基因构建的重组载体。

4.一种由权利要求3所述重组载体转化制备的重组α-半乳糖苷酶基因工程菌。

5.如权利要求4所述的重组基因工程菌，其特征在于所述重组α-半乳糖苷酶基因工程菌以酿酒酵母为宿主菌构建而成。

6.一种权利要求2所述重组α-半乳糖苷酶在降解含α-半乳糖苷键底物中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷或棉子糖。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述的底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-半乳糖苷，所述的应用为：将重组α-半乳糖苷酶基因工程菌接种至添加有底物和IPTG的YNB筛选培养基，在30℃培养完全，获得降解产物5-氯-4-溴-3-吲哚；所述底物以4mg/mL二甲基甲酰胺溶液的形式加入，所述底物溶液与IPTG体积比为1.5:1。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的底物为棉子糖，所述的应用为：将重组α-半乳糖苷酶基因酿酒酵母工程菌接种至YNB筛选培养基，在30℃、180rpm条件下培养到对数期，然后以体积浓度10％的接种量转接入YPGR诱导培养基中进行表达，30℃培养12h后，将发酵液离心收集细胞后，超声波破碎后，取破碎混合液与棉子糖溶液以体积比1:1混合，60℃水解反应完全，实现对棉子糖的降解；所述棉子糖溶液是以pH5.5、50mM的MES缓冲液为溶剂配制成0.01g/mL；所述YPGR诱导培养基终浓度组成：蛋白胨20g/L，酵母提取物10g/L，棉子 糖20g/L，半乳糖20g/L，溶剂为水，pH自然。