[发明专利]一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法

说明书

本发明公开了一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法，所述内源激素为ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄，采用UPLC‑MS/MS，色谱条件为：流动相A：0.1％乙腈、0.05％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱。本发明的方法，特异性强，灵敏度高，通量高，结果客观易于分析，不仅可以对小麦生长发育中内源激素的失衡等进行确定，还可以为小麦外源激素的补充提供指导，减少盲目补充外源激素的现象的发生。

技术领域

本发明涉及小麦叶片内源激素的检测方法，尤其涉及一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法。

背景技术

植物激素是由植物自身代谢产生的一类有机物质，并自产生部位移动到作用部位，在极低浓度下就有明显的生理效应。

植物基因的表达、生长发育以及植物对某种环境刺激的反应均受其体内多种激素的调控。植物激素是植物体内天然存在的有机化合物，虽然含量很低，但是调控植物生命活动的整个过程，因此它们与植物生长发育的基本规律和代谢的调控都密切相关。植物内源激素的研究是植物生理学领域的重要内容之一，植物内源激素在植物体内含量的准确测定，对植物生命活动和作物遗传育种、栽培等领域具有重要的意义。

赤霉素(GA)能够促进麦芽糖的转化、影响生长，防止器官脱落和打破休眠。脱落酸(ABA)能够抑制生长、促进休眠、促进果实与叶的脱落、促进气孔关闭、影响开花和性分化。茉莉酸(JA)抑制植物生长、萌发、促进衰老、提高抗性等生理作用。水杨酸(SA)是一种简单的酚类化合物，在植物的防御方面起重要作用。玉米素核苷(ZR)能够维持叶片功能，抑制衰老。玉米素(ZT)能够促进愈伤组织发芽，并且促进坐果。

目前，小麦栽培育种等过程中激素使用意识不断增强，但是由于缺乏科学的指导，激素使用现状比较混乱，为了达到提高小麦的产量与品质的目的，盲目的大量使用外源激素，而忽略植物本身激素含量水平，导致小麦体内激素含量不均衡，非但没有起到有利的效果，甚至还会出现影响小麦籽粒灌浆等问题。

如何了解小麦生长发育过程中需要的相关激素的含量，只有通过检测小麦叶片等器官中激素的真实状态，根据检测结果有针对性的调整需要的激素，检测是科学评估和个性化使用激素的科学依据。

早期植物激素的测定，基本都是采用生物测试方法，但因灵敏度和选择性不足，已被逐渐淘汰。气相色谱-质谱(GC-MS)和以单克隆抗体为基础的免疫法，都是现代植物激素检测的新技术，在GC-MS法中，选择性离子检测技术更加迅速有效，它不仅具有高的灵敏度，而且能准确鉴定激素的分子结构，但这些方法均需经冗长的样品纯化程序，设备昂贵，使用和维护成本高。目前超高效液相色谱串联质谱分析植物内源激素含量的已有报道，但是由于ABA对光敏感，JA和SA遇热不稳定，ZR和ZT在叶片尤其是衰老叶片中含量极低，GA₃、GA₄差异仅在于双键、羧基数目和位置的不同，所以还没有利用该方法同时检测小麦叶片中七种内源性激素ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄的报道。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法，所述内源激素为ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄，采用UPLC-MS/MS，色谱条件为：流动相A：0.1％乙腈、0.05％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱(优选的：0-0.2min，90％A，0.2-2min，90％A-10％A线性降低，2-3min，10％A，3-3.1min，10％A-90％A线性提高，3.1-5min，90％A)。

优选的：所述色谱柱为C18，1.7m，2.1×100mm，柱温为40℃。