[发明专利]一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法

权利要求书

1.一种同时检测小麦叶片中七种内源激素的方法，其特征是：所述内源激素为ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄，采用UPLC-MS/MS，色谱条件为：色谱柱为C18，1.7μm，2.1×100mm，流动相A：0.1％乙腈、0.05％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱；所述梯度洗脱为：0-0.2min，90％A，0.2-2min，90％A-10％A线性降低，2-3min，10％A，3-3.1min，10％A-90％A线性提高，3.1-5min，90％A；

所述检测方法的具体步骤为：

(1)样品处理：将液氮条件下磨碎的小麦叶片中加入萃取剂后混匀，所述萃取剂为丙酮：柠檬酸水溶液＝70:30，体积比；

(2)加入混合内标混匀，所述混合内标包含DHJA、D₆-SA、D₆-ABA、D₂-GA₄、D₅-ZR、D₅-ZT 6种；

(3)将步骤(2)中的混合物于避光低温条件下摇床上摇匀；

(4)将步骤(3)处理后的混合物去除丙酮后，加入乙醚混匀，离心取上清液；

(5)将步骤(4)得到的上清液去除色素挥发乙醚后加入甲醇溶解，过滤后采用超高效液相色谱串联质谱对JA、SA、ABA、ZR、ZT测定；

(6)将步骤(4)得到的上清液进行固相萃取，具体如下：固相萃取柱为：Waters OasisMAX固相萃取小柱，活化：甲醇、2％氨水，体积比为1:1，上样，淋洗1：2％氨水，淋洗2：甲醇，洗脱：1％甲酸-甲醇，挥发洗脱液后加入甲醇溶解，过滤后采用超高效液相色谱串联质谱对GA₃、GA₄测定。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是：柱温为40℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述质谱条件为：MS系统：ACQUITY XEVO TQ-S，电离模式：ZR、ZT为电喷雾离子源正离子模式，JA、SA、ABA、GA₃、GA₄为电喷雾离子源负离子模式；源温度：150℃，脱溶剂气温度：450℃；脱溶剂气流速：1000L/h，锥孔气流速：150L/h，碰撞气流速：0.15mL/min，毛细管电压：正离子为3.0KV，负离子为2.5KV；脱溶剂气温度：450℃；扫描模式：多反应监测MRM；雾化气：氮气。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是：所述步骤(5)中去除色素的方法为：将上清液中加入石墨化炭黑，混匀，离心即可。

5.一种同时检测小麦幼穗或根部七种内源激素的方法，其特征是：包括权利要求1-4任一所述的方法，所述七种激素为：ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄。

6.权利要求1-4任一所述的方法在检测小麦幼穗或根部中七种内源激素的应用，所述七种激素为：ZR、ZT、JA、SA、ABA、GA₃、GA₄。