[发明专利]一种具有S-雌马酚抗性的大肠杆菌突变株及应用

权利要求书

1.一种具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌（Escherichia coli）突变株，其特征在于所述大肠埃希氏菌突变株是将来源于乳酸菌（Lactococcus sp.）20-92的L-DDRC、L-DZNR、L-DHDR和L-THDR基因克隆至大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BL21 - G2转化得到；所述L-DDRC的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示、L-DZNR的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示、L-DHDR的核苷酸序列为SEQ ID NO：3所示，L-THDR的核苷酸序列为SEQ ID NO：4所示；所述大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BL21 - G2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No. 14219，保藏日期2017年6月5日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101。

2.一种权利要求1所述具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌突变株在制备S-雌马酚中的应用。

3.如权利要求2所述具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌突变株在制备S-雌马酚中的应用，其特征在于所述的应用为：以大豆素为底物，将具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌突变株经扩大培养获得的种子液以体积浓度5%的接种量接种至LB培养基，在好氧或厌氧条件下，37℃培养24h，向培养液中加入终浓度25 mg/L的IPTG，37℃继续培养6~72h后，取培养液分离纯化，获得S-雌马酚；所述LB培养基终浓度组成：胰蛋白胨10 g/L、酵母提取物5.0 g/L、氯化钠10 g/L，溶剂为蒸馏水，pH值为7.0；所述大豆素的初始浓度为50μg/ml。

4.如权利要求2所述具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌突变株在制备S-雌马酚中的应用，其特征在于所述的应用为：以大豆素为底物，将具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌突变株经扩大培养获得的种子液以体积浓度5%的接种量接种至LB培养基，在好氧或厌氧条件下，37℃培养24h，向培养液中加入终浓度25 mg/L的IPTG，37℃继续培养6~72h后，取培养液分离纯化，获得S-雌马酚；所述LB培养基终浓度组成：胰蛋白胨10 g/L、酵母提取物5.0 g/L、氯化钠10 g/L，溶剂为蒸馏水，pH值为7.0；所述大豆素的初始浓度为50μg/ml。

5.如权利要求3所述具有S-雌马酚抗性的大肠埃希氏菌突变株在制备S-雌马酚中的应用，其特征在于所述培养液分离纯化的方法为：取1ml的培养液，8000 r/min 离心3分钟，获得上清a；取900µl上清a至另一干净的2 ml EP管中，然后向管中加入900 µl乙酸乙酯，充分混匀后静置5min，5000 r/min 离心5分钟，获得上清b和沉淀b；取900 µl上清b至另一干净的2 ml EP管中；取沉淀b加入等量的乙酸乙酯重复离心1次，获得上清c；将上清b和上清c混合在一起，移到2ml离心管中，45℃真空冷冻浓缩成粉末；加入200 µl 无水甲醇到该EP管溶解浓缩粉末，并经0.22 μm聚偏氟乙稀微孔滤膜过滤，滤液即为S-雌马酚。