[发明专利]一种用于检测油菜茎基溃疡病菌的引物探针组合及检测方法

权利要求书

1.引物对，由引物F和引物R组成；

所述引物F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子。

2.引物探针组合，由权利要求1所述的引物对和探针组成；

所述探针如下所示：

区段A-(dT-荧光基团)-四氢呋喃残基-(dT-猝灭基团)-区段B；

在所述探针的3'端进行修饰；

所述区段A如序列表的序列3所示；

所述区段B如序列表的序列4所示。

3.如权利要求2所述的引物探针组合，其特征在于：所述荧光基团为FAM；所述淬灭基团为BHQ1。

4.如权利要求2或3所述的引物探针组合，其特征在于：所述“在所述探针的3'端进行修饰”为采用C3-spacer或磷酸盐或生物素-TEG或胺进行修饰。

5.权利要求1所述的引物对或权利要求2-4任一所述的引物探针组合的应用，为如下(b1)-(b4)中的至少一种：

(b1)鉴定或辅助鉴定待测菌株是否为油菜茎基溃疡病菌；

(b2)检测待测样本中是否含有油菜茎基溃疡病菌；

(b3)制备用于鉴定或辅助鉴定待测菌株是否为油菜茎基溃疡病菌的试剂盒；

(b4)制备用于检测待测样本中是否含有油菜茎基溃疡病菌的试剂盒。

6.含有权利要求1所述引物对的试剂盒甲，或，含有权利要求2-4任一所述引物探针组合的试剂盒乙；所述试剂盒的用途为如下(c1)或(c2)：

(c1)鉴定或辅助鉴定待测菌株是否为油菜茎基溃疡病菌；

(c2)检测待测样本中是否含有油菜茎基溃疡病菌。

7.权利要求6所述试剂盒甲或试剂盒乙的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。

8.鉴定待测菌株是否为油菜茎基溃疡病菌的方法，包括如下步骤：以待测菌株的总DNA为模板，采用权利要求2-4任一所述的引物探针组合进行重组酶介导等温扩增，如果在6-20分钟之间有荧光信号升起、待测菌株为或候选为油菜茎基溃疡病菌，如果在6-20分钟之间均没有荧光信号升起、待测菌株为或候选为非油菜茎基溃疡病菌。

9.检测待测样本中是否含有油菜茎基溃疡病菌的方法，包括如下步骤：以待测样本的总DNA为模板，采用权利要求2-4任一所述的引物探针组合进行重组酶介导等温扩增，如果在6-20分钟之间有荧光信号升起、待测样本含有或疑似含有油菜茎基溃疡病菌，如果在6-20分钟之间均没有荧光信号升起、待测样本不含有或疑似不含有油菜茎基溃疡病菌。