[发明专利]遗传性甲状腺癌致病突变位点检测试剂盒

说明书

本发明属生物技术领域，涉及遗传性甲状腺癌致病突变位点检测试剂盒，具体涉及检测遗传性甲状腺癌RET、PTEN基因是否发生致病位点突变的试剂盒。该试剂盒的主要成分包括：(1)RET、PTEN基因致病位点区域PCR扩增与测序引物14对；(2)PCR扩增试剂；(3)PCR产物纯化试剂；(4)DNA测序试剂。采用本发明所述的试剂盒用于检测遗传性甲状腺癌RET、PTEN基因致病位点突变情况，可以快速方便地查出该基因的携带者；预测中国人群该疾病的易感风险，从而指导早期筛查及预防。

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及遗传性甲状腺癌致病突变位点检测试剂盒，具体涉及检测遗传性甲状腺癌RET、PTEN基因是否发生致病位点突变的试剂盒。

背景技术

现有技术公开了甲状腺癌是中国女性十大癌症之一，为最常见的内分泌系统肿瘤，依据美国癌症协会的统计为女性第5位常见的恶性肿瘤，为亚裔女性第4位常见的恶性肿瘤。

研究表明，甲状腺癌呈现较高的家族聚集性，尤其在甲状腺髓样癌中，大约20％的病人为遗传性。遗传性甲状腺髓样癌主要表现为家族性甲状腺髓样癌、II型多发性内分泌肿瘤综合征(MEN2)，MEN2分为MEN2A和MEN2B二种亚型，都表现为患者有极高的风险罹患甲状腺髓样癌。大量研究已确认RET基因突变是遗传性甲状腺髓样癌发病的主要分子病因学基础，约95％的遗传性甲状腺髓样癌和80％以上的散发性甲状腺髓样癌是由RET基因突变引起的。Cowden综合征(CS)，一种由PTEN基因胚系变异引起的一种常染色体显性病变。CS的特征是多发的错构瘤，可累及生殖细胞所有三个胚层的器官，并对乳腺癌、子宫癌和非髓性甲状腺癌有高度患病风险，其患者一生有大约35％的可能性罹患甲状腺癌(主要为甲状腺滤泡性癌)。

自2005年起，基因检测技术在肿瘤诊断领域的应用正在逐步扭转美国肿瘤患者的生存局面。目前，美国已有超过500万人做了基因检测，使得一些重大慢性病治愈率大幅提高，如家族型肠癌的发病率降低了90％，死亡率降低了70％；英国超过200万人做了基因检测，目前基因检测已成为该国人身保险必选项目。据统计，由于基因检测技术的应用，美国结肠癌发病率下降了90％，乳腺癌的可治愈率达到96％以上，卵巢癌5年生存率提高了80％～90％，肝癌死亡率降低37％。美国、英国等发达国家都是基因检测大国，基因检测已经成为这些发达国家新兴的主导产业。在基因科技开发与应用上，中国与发达国家处于同一起跑线。未来我国两到三年内认识到基因检测重要性的人群将达到总人口的15％～20％，约有3亿人的市场潜在需求，每年基因检测量至少在300万人次以上，市场空间非常巨大。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供一种遗传性甲状腺癌致病突变位点检测试剂盒，具体涉及检测遗传性甲状腺癌RET、PTEN基因是否发生致病位点突变的试剂盒。本产品可以通过遗传性甲状腺癌致病基因(RET、PTEN)致病位点突变情况检测，建立中国人群在该疾病中的基因信息情况数据库，使用关键技术为Sanger测序(准确性大于99.9％)，通过该项目检测热点突变可以预测中国人群该疾病的易感风险，从而指导早期筛查及预防。

发明内容

本发明的目的是提供一种遗传性甲状腺癌致病突变位点检测试剂盒，具体涉及采用DNA测序技术检测遗传性甲状腺癌RET、PTEN基因是否发生致病位点突变的试剂盒。

本检测试剂盒主要包括以下成分：

(1)RET、PTEN基因致病位点区域PCR扩增与测序引物14对，引物序列如表1；

(2)常规PCR扩增试剂，如dNTP、Taq DNA聚合酶等；

(3)常规PCR产物纯化试剂，如SAP酶、ExoI酶等；

(4)常规DNA测序试剂，如BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、Hi-Di溶液等。

表1 RET、PTEN基因致病位点区域的PCR扩增与测序引物序列