[发明专利]遗传性甲状腺癌致病突变位点检测试剂盒在审
| 申请号： | 201710509883.2 | 申请日： | 2017-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN109136368A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 马端;姜昕;徐沁;唐帅男;景丹丹;张静 | 申请（专利权）人： | 海门中科基因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200030 上海市徐汇*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 甲状腺癌 遗传性 突变位点检测 位点突变 生物技术领域 测序引物 早期筛查 中国人群 检测 位点 基因 携带 疾病 预测 预防 | ||
1.遗传性甲状腺癌致病位点检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：RET、PTEN基因致病位点区域PCR扩增与测序引物14对、PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂和DNA测序试剂；所述引物序列如下所示：
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物序列扩增的DNA序列如SEQ IDNO.1所示。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂选自dNTP或Taq DNA聚合酶。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR产物纯化试剂选自SAP酶或ExoI酶。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的DNA测序试剂选自BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液和/或Hi-Di溶液。
6.一种检测遗传性甲状腺癌致病位点的方法，其特征在于，采用权利要求1的试剂盒检测待测样本的遗传性甲状腺癌致病位点是否突变，其包括步骤：
(1)提取样本的基因组DNA；
(2)RET、PTEN基因PCR扩增；
(3)PCR产物纯化
(4)DNA测序反应，检测遗传性甲状腺癌致病位点是否突变。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)的RET、PTEN基因PCR扩增，采用权利要求1所述引物序列；每个PCR扩增体系总体积为50μL，包含Taq酶混合液25μL、去离子水17μL、引物对3μL、基因组DNA 2μL；PCR反应条件为95℃3分钟，进行35个循环的95℃30秒，56℃20秒，72℃30秒，最后进行72℃5分钟。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，PCR产物纯化中每个反应体系总体积为5.6μL，包括PCR产物4μL和1.6μL SAP酶混合物，反应条件为37℃45分钟，85℃15分钟。
9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)的DNA测序反应中，每个反应的体系为总体积10μL，包括PCR酶解产物1μL、BigDye mix 2.2μL和测序引物0.5μL，余量为去离子水；反应条件为96℃1min，进行33个循环的96℃10sec，56℃10sec，60℃2.5min；
反应结束后每管内加入2.5μL EDTA，30μL100％乙醇，盖好，震荡4次，避光静置15分钟，3860rpm，25℃离心40min，吸弃上层液体；加入100μL 70％预冷乙醇，盖好，3860rpm，25℃离心15分钟，吸弃上层液体；使酒精室温挥发干净，加入8μLHi-Di溶解DNA；在PCR仪上变性：95℃4分钟，冰上静置4分钟，放入测序仪中测序，检测遗传性甲状腺癌致病位点是否突变。
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