[发明专利]一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法

说明书

技术领域

本发明是一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，属于辣椒炭疽病室内抗性鉴定技术领域。

背景技术

辣椒炭疽病一般由5种病原菌引起，即红色炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides＝Gloeosporium piperatum)，黑色炭疽病菌 (C.coccodes＝C.nigrum)、黑点炭疽病菌(C.capsici)、尖孢炭疽菌(C.acutatu)和黑线炭疽菌(C.dematium)，在湖南省以红色炭疽菌危害为主。辣椒炭疽病主要危害叶片和果实。初侵染时呈水浸状黄褐色圆斑，进而发展为中央灰褐色，有同心轮纹，上生小黑点的圆型或不规则型病斑，干燥时呈现膜状且易破裂。病菌侵染叶片时，初期病斑呈褪绿呈水渍状，慢慢扩大，病斑中间灰白色，周围褐色。在果实上，病斑表面初生为水渍状，逐渐扩展为褐色凹陷，圆形或不规则形状，病斑上生有黑点，为病原菌分生孢子，受害的辣椒茎病部呈不规则或梭形病斑，纵裂凹陷。在我国辣椒种植区，辣椒炭疽病是一种常发真菌性病害，辣椒染病后可引起(30-85)％产量损失。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，以解决上述背景技术中提出的问题,本发明使用方便，便于操作，设计巧妙，提高了市场竞争力。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，包括：

培养基制备；

接种体分离；

接种体鉴定；

接种体保存；

接种体复壮；

接种孢子制备；

鉴定设计；

鉴定材料准备；

对照品种选择；

接种以及接种后管理；

病情调查；

抗病性评价。

进一步地，所述培养基制备包括制备水琼脂培养基以及制备马铃薯培养基：在制备水琼脂培养基中，以1L培养基为列：用5个250ml三角瓶每个装入200ml纯净水和4g琼脂粉然后加热至121℃，灭菌30min后取出，冷却后贮存备用，在制备马铃薯培养基中，以1L为列：称取马铃薯200g，切成细条或片状，放入锅中蒸煮当马铃薯煮至熟而不烂时，在1L量筒上用纱布过滤马铃薯残渣，定容至1L，用5个250ml三角瓶每个分别加入200ml滤液、4g葡萄糖、和4g琼脂粉然后121℃，灭菌30min后取出，冷却后贮存备用。

进一步地，接种体分离的具体步骤为：从田间采集刚开始发病的辣椒炭疽病病果，在超净工作台上，用手术刀取0.5cm×0.5cm的病健部，先用75％酒精的消毒30s,再放入0.1％的次氯酸钠中浸泡2min，用灭菌水清洗3次后，用灭菌滤纸吸干病健块的水分，插入倒的水琼脂平板上，放置28℃人工气候箱中黑暗培养2d，待长出菌丝后再转接在PDA平板上，获得分离物。

进一步地，接种体鉴定的具体步骤为：将培养7d后的分离物在显微镜下进行菌丝、孢子形态观察，如符合辣椒炭疽病病原菌的形态特征，用CTAB法提取分离物菌丝DNA，经过对获得的DNA进行电泳分析，分离物的DNA提取成功将分离物的DNA进行PCR扩增，扩增产物用1％琼脂凝胶电泳检测，将得到的rDNA ITS序列提交至GenBank,BLAST进行对比，如与辣椒炭疽病病原物的 ITS序列具有99％的相似，即可确定是辣椒炭疽病病原菌。