[发明专利]一种外源蛋白安全性的快速评价方法

权利要求书

1.一种外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将编码外源蛋白的基因克隆入pPICZb载体，得到外源蛋白表达重组载体；

（2）将外源蛋白表达重组载体转化毕赤酵母，筛选，鉴定，得到表达外源蛋白的毕赤酵母；

（3）将表达外源蛋白的毕赤酵母每天灌胃啮齿类动物，连续90天；同时设置空白对照组和阴性对照组；空白对照组为正常饮食+生理盐水，阴性对照组I为正常饮食+毕赤酵母宿主菌，阴性对照组II为正常饮食+转化pPICZb载体的毕赤酵母菌，实验组即为正常饮食+表达外源蛋白的毕赤酵母；所有酵母样品统一用超声波破碎法进行细胞破碎，同时防止蛋白降解；

（4）日常观察啮齿类动物的健康状态；

（5）90天末处理啮齿类动物，取肝、脾、心和肾组织，石蜡切片；

（6）免疫组化鉴定外源蛋白在组织器官中的分布；

（7）病理切片分析各组各器官的炎症反应情况；

（8）依据炎症反应情况，判断该外源蛋白的安全性。

2.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：所述的外源蛋白为5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶和来源于苏云金芽孢杆菌所产的内源性晶体蛋白Cry1Ab中的一种或两种。

3.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：步骤（2）中所述的毕赤酵母为毕赤酵母GS115。

4.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：步骤（2）中所述的鉴定为通过western blotting 方法进行鉴定。

5.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：步骤（3）中所述的啮齿类动物为大鼠。

6.根据权利要求5所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：所述的大鼠为SD大鼠。

7.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：步骤（3）中所述的灌胃量为OD₆₀₀=2的酵母破碎液2～3ml。

8.根据权利要求7所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：所述的灌胃量具体为：第1个月每天灌胃的量为OD₆₀₀=2的酵母破碎液2ml，第2、第3个月每天灌胃的量为OD₆₀₀=2的酵母破碎液3ml。

9.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：所述的健康状态包括饮食，精神状态以及有无发病。