[发明专利]基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法

权利要求书

1.一种基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)标准工作曲线的绘制：采用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配置8个浓度在0.05～30 µmol/L范围内的叶酸标准溶液，加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液定容至5mL，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为350 nm，发射波长为440 nm测定荧光强度，以荧光猝灭强度对其相应浓度作图进行回归分析，即得到标准工作曲线，由此得到叶酸的线性回归方程；

(2) 样品处理

①血液样品：取5 mL新鲜血液，以8000 r/min转速离心15-20 min，去除沉淀，并向上层血浆中加入1-2mL体积浓度10-15% 的高氯酸溶液沉淀蛋白，于5000 r/min下离心10 -15min，取上清液避光保存于4 ℃冰箱待分析测定；

②尿液样品：取5-10mL尿液，加入1-3g活性炭，涡旋混合30-60s，静置过滤，取其滤液，避光保存于4 ℃冰箱待分析测定；

(3) 样品测定：取步骤或步骤处理过的样品，加入磁性纳米材料，涡旋使其充分混匀后，通过外加磁铁进行磁分离，弃去磁性纳米材料，取上清液1-2mL，向上清液中加入水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液，用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液定容至5mL，涡旋混匀静置后，于荧光分光光度计上，激发波长为350 nm，发射波长为440 nm测定荧光强度，代入步骤(1)回归方程，计算出样品中叶酸的含量；

所述水溶性氮掺杂荧光碳量子点的制备方法为称取2.0-5.0g氨基三乙酸加入到100mL超纯水中，超声5 min形成白色悬浊液，并转移至聚四氟乙烯反应釜，于200-250℃加热5-10h，自然冷却后，先用孔径为0.22μm滤膜过滤，后用截留分子量为3000-3500Da 的透析袋进行透析处理24 h，得到水溶性氮掺杂荧光碳量子点；

所述磁性纳米材料的制备方法为称取2.05-2.50g 硫酸亚铁铵和1.41-2.00g三氯化铁溶解于50mL去离子水中，将混合液转移至三口烧瓶中，氮气保护下搅拌并水浴加热；当反应液加热至75-85℃时，加入5-10mL含100 µL或100 mg壬酸的丙酮溶液；待混合物剧烈搅拌5-8 min后加入5-7mL氨水，氨水的质量体积浓度为28%，连续反应30 min后自然冷却至室温，利用外加磁铁将其产物分离，分别依次用乙醇和蒸馏水各洗涤3-5次，真空干燥后得磁性纳米材料。

2.根据权利要求1所述的基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，其特征在于：柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH为4-6。

3.根据权利要求1所述的基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，其特征在于：磁性纳米材料用量为5-30mg。

4.根据权利要求1所述的基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，其特征在于：水溶性氮掺杂荧光碳量子点溶液用量为400μL。

5.根据权利要求1所述的基于磁固相微萃取-碳量子点荧光猝灭检测叶酸的方法，其特征在于：涡旋混匀静置是指涡旋混匀1-15min，然后静置10-20 min。