[发明专利]一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽及其确定、制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物信息学和免疫学技术领域，具体涉及一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽及其确定、制备方法和应用。

背景技术

小反刍兽疫病毒(PPRV)属于麻疹病毒属(Morbillivirus)，是引起山羊和绵羊等小反刍动物急性传染病的病原，该病特点是高发病率和高死亡率，被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告动物传染病，我国将其列为I类动物疫病。最初的报道小反刍兽疫病毒仅感染山羊和绵羊，但近几年病毒种间传播的病例被不断报道，目前该病主要分布于非洲和亚洲，正威胁欧洲。

目前，该病的主要预防手段是弱毒疫苗免疫，但是该疫苗存在热稳定性和毒力反强等问题，并且不利于小反刍兽疫的全球消灭计划，HN是镶嵌在PPRV囊膜上的糖蛋白，构成病毒粒子表面的纤突，HN蛋白能够与淋巴细胞上的SLAM受体相互作用介导病毒入侵，因此HN蛋白的决定宿主嗜性；另外，因受体SLAM是主要部分与淋巴细胞等免疫细胞上，可能是小反刍兽疫病毒导致机体免疫抑制的主要原因，小反刍兽疫病毒能引起机体强烈的细胞免疫和体液免疫应答，而HN蛋白则是主要的保护性抗原，HN蛋白是疫苗设计和检测方法建立的重要靶标，因此HN蛋白的抗原表位图谱绘制和抗体制备具有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供了一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽。

本发明的另一目的在于提供该小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽在小反刍兽疫病毒表位疫苗抗原和诊断试剂抗原制备中的应用。

本发明的另一目的在于提供该小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位的确定、制备方法。

本发明采用的技术方案为：一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列为：H123：¹²³KFLNPDREYDFRDLR¹³⁷,或/和H185：¹⁸⁵GTGCLGRTVTRA¹⁹⁶,或/和H487：⁴⁸⁷IRGPRGRCH⁴⁹⁵,或/和H569：⁵⁶⁹ECFPWYHKVWCYHDCLI⁵⁸⁵。

一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位肽在小反刍兽疫病毒表位疫苗抗原和诊断试剂抗原制备中的应用。

一种小反刍兽疫病毒HN蛋白抗原表位的确定、制备方法，所述方法包括如下步骤：

计算模拟：

步骤一，用分子模拟软件构建虚拟HN蛋白头部3D结构：利用Discovery Studio V4.5对这两个目标蛋白——野毒株PPRV HN和疫苗株PPRV HN蛋白进行同源模建；其中PPRV Hw，GenBank登录号为FJ905304；PPRV Hv，GenBank登录号：X74443；

步骤二，搜索模板：搜索PDB数据库(www.pdb.org)，寻找通过实验解析出的同源蛋白的结构，选择序列一致性在30％以上，并且比对序列较长的蛋白结构作为模板结构，进行后续的计算；

步骤三，调整序列比对：选取模板蛋白之后，从PDB数据库中获得蛋白的空间坐标，将得到的模板蛋白序列与目标蛋白进行比对；

步骤四，建模：将比对结果提交服务器，根据模板蛋白的空间坐标和序列的相似性推测结构，从而计算得到目标蛋白结构，即每次模建生成至少5个不同的目标蛋白结构，要求PDF Total Energy较低的同时选择DOPE Score最低的模型进行后续计算；

步骤五，优化：采用CHARMm力场，先进行Steepest Decent优化5000步，再进行Conjugate Gradient优化2000步；

步骤六，评估结构：采用拉氏构象图分析方法评估蛋白结构的合理性，若位于不许可区的非甘氨酸/脯氨酸所占比例不超过5％，则说明模拟的蛋白结构是合理的，可以进行后续的计算分析；

基于免疫信息学的预测：

步骤一，PPRV-HN蛋白B细胞抗原表位预测：将PPRV HN蛋白的氨基酸序列用IEDB、Immunomedicine Group和BepiPred免疫信息学分析软件进行分析，综合分析预测其B细胞抗原表位；

步骤二，抗原表位的合成：将软件预测的抗原表位氨基酸序列送GeneScript公司用多肽合成仪合成，合成后用高效液相色谱(high performance liquid chromatography，HPLC)分析多肽合成的纯度及氨基酸的正确性；

抗体的制备；