[发明专利]一种大花胡麻草组织培养方法

说明书

本发明公开了一种大花胡麻草组织培养方法，包括以下步骤：(1)外植体选择和预处理；(2)种子萌发培养；(3)实生苗分化增殖培养；(4)分割苗诱导生根培养；(5)炼苗与移栽。本发明通过对大花胡麻草组织培养过程中种子消毒方法、增殖培养方法、壮苗生根方法进行了改进，解决了种子易污染、繁殖系数低、易褐化等问题，通过本方法培养出的大花胡麻组培苗繁殖系数高、生长速度快、移栽成活率高；此外，本发明提供的方法简便易行、可操作性强、重现性好。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种培养方法，更具体的涉及一种大花胡麻草组织培养方法。

背景技术

大花胡麻草(Centranthera grandiflora Bench.)，玄参科胡麻草属植物，别名化血丹、红根野蚕豆、野蚕豆根、小红药、灵芝草等，主要分布于我国云南、贵州、广西等地及印度、缅甸等地。大花胡麻草生物学特征为全株被刚毛，须根为锈红色，茎部刚硬，具分枝；叶片对生，无叶柄，长圆形或条形，全缘；花腋生，花萼为佛焰苞状，苞片为叶状，花冠为管状，棕黄色。为云南民间名贵的地方中药，药用根，经化学分析鉴定其根部含环烯醚萜苷如桃叶珊瑚苷、玉叶金花苷、8-表番土鳖酸、8-表番土鳖碱、玉叶金花酸、梓醇等化学成分及杜鹃红素、甘露醇等化合物，具有消肿散瘀、止血止痛等作用，可用于治疗女性痛经、闭经及风湿骨痛、跌打损伤，还对心脑血管疾病具有显著疗效，具有很高的开发价值。

由于大花胡麻草根经济价值高，其市场需求逐年增加，而目前野生资源已被大量开采。大花胡麻草对生态环境要求严格，其种子发芽率低，生长慢，远不能满足需求。应用组织培养技术进行快速繁殖并成功生根移栽，对于解决资源紧缺和实现产业化开发具有重要的意义。前人在大花胡麻草的组织培养关键技术环节已进行了相关研究，但其组织培养过程中诸如外植体污染严重、繁殖系数低等问题还没得到有效解决。

发明内容

针对上述现有技术中的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单、可操作性强，且可以提高繁殖系数、移栽成活率高的大花胡麻草组织培养方法。

为实现上述目的提供一种大花胡麻草组织培养方法，本发明采用了以下技术方案：

一种大花胡麻草组织培养方法，该方法包括：(1)外植体选择和预处理；(2)种子萌发培养；(3)实生苗分化增殖培养；(4)分割苗诱导生根培养；(5)炼苗与移栽；

所述外植体选择和预处理步骤中，选择野外收集的大花胡麻草种子作为外植体，然后对种子进行预处理；

所述种子萌发培养步骤中，将经过处理的大花胡麻草种子接种于种子萌发培养基进行培养，培养2-3周后获得无菌实生苗；

所述实生苗分化增殖培养步骤中，选择1-2cm高的无菌实生苗在超净工作台上接种于增殖培养基进行继代培养，培养3-4周后获得组培丛芽；

所述分割苗诱导生根培养步骤中，将获得的4-6cm长苗的组培丛芽进行分割处理，将分割苗接种于生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；

所述炼苗与移栽步骤中，当根长达到2-5cm时，进行炼苗3-5天，后取出组培苗，进行移栽。

优选的，所述外植体选择和预处理步骤中：在收集的大花胡麻草种子中，挑选种荚未开裂的种子作为外植体，然后进行预处理；

所述预处理包括前处理与消毒灭菌处理步骤；

其中，所述前处理步骤为：先用75wt％酒精擦拭种荚表面，将种子破壳取出后置于灭菌的1.5mL的离心管中，加入1mL无菌水浸泡1-2h，待种子吸足水分后，在1000rpm的条件下离心3-5min，倒掉上清液，准备下一步消毒；

所述消毒灭菌处理步骤为：将前处理后的种子置于超净工作台中，用75％的酒精消毒30-60秒，再用体积浓度为0.1％的升汞浸泡8-10min，后使用无菌水冲洗6-8次。