[发明专利]一种大花胡麻草组织培养方法

权利要求书

1.一种大花胡麻草组织培养方法，该方法包括：(1)外植体选择和预处理；(2)种子萌发培养；(3)实生苗分化增殖培养；(4)分割苗诱导生根培养；(5)炼苗与移栽；其特征在于：

所述外植体选择和预处理步骤中，选择野外收集的大花胡麻草种子作为外植体，然后对种子进行预处理；

所述种子萌发培养步骤中，将经过处理的大花胡麻草种子接种于种子萌发培养基进行培养，培养2-3周后获得无菌实生苗；

所述实生苗分化增殖培养步骤中，选择1-2cm高的无菌实生苗在超净工作台上接种于增殖培养基进行继代培养，培养3-4周后获得组培丛芽；

所述分割苗诱导生根培养步骤中，将获得的4-6cm长苗的组培丛芽进行分割处理，将分割苗接种于生根培养基中进行诱导生根培养，获得组培苗；

所述炼苗与移栽步骤中，当根长达到2-5cm时，进行炼苗3-5天，后取出组培苗，进行移栽；

所述实生苗分化增殖培养步骤中，所述增殖培养基为在WPM培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤0.4-0.6mg/L、萘乙酸0.04-0.06mg/L、蔗糖20-30g/L以及琼脂粉6-7g/L，并调节PH至5.5-6.0所得的培养基；所述培养基置于透明玻璃培养瓶中并给予光照12-14h/天，其中，光照强度为1500-2000LX，温度为25℃±2℃；

所述的种子萌发培养基、增殖培养基、生根培养基中分别含有活性炭0.5-0.8g/L。

2.根据权利要求1所述的一种大花胡麻草组织培养方法，其特征在于，所述外植体选择和预处理步骤中：在收集的大花胡麻草种子中，挑选种荚未开裂的种子作为外植体，然后进行预处理；

所述预处理包括前处理与消毒灭菌处理步骤；

其中，所述前处理步骤为：先用75wt％酒精擦拭种荚表面，将种子破壳取出后置于灭菌的1.5mL的离心管中，加入1mL无菌水浸泡1-2h，待种子吸足水分后，在1000rpm的条件下离心3-5min，倒掉上清液，准备下一步消毒；

所述消毒灭菌处理步骤为：将前处理后的种子置于超净工作台中，用75％的酒精消毒30-60秒，再用体积浓度为0.1％的升汞浸泡8-10min，后使用无菌水冲洗6-8次。

3.根据权利要求1所述的一种大花胡麻草组织培养方法，其特征在于，所述种子萌发培养步骤中，所述种子萌发培养基为在MS培养基中添加蔗糖20-30g/L、琼脂粉6-7g/L，并调节PH至5.5-6.0所得的培养基；所述培养基置于透明玻璃培养瓶中并给予光照10-12h/天，其中，光照强度为1500-2000LX，温度为25℃±2℃，在此条件下培养2-3周诱导种子萌发出苗。

4.根据权利要求3所述的一种大花胡麻草组织培养方法，其特征在于：所述的种子萌发培养基的pH调节至5.8。

5.根据权利要求1所述的一种大花胡麻草组织培养方法，其特征在于，所述分割苗诱导生根培养步骤中，所述生根培养基为在WPM培养基中添加萘乙酸0.1-0.3mg/L，蔗糖20-30g/L以及琼脂粉6-7g/L，并调节PH至5.5-6.0所得的培养基；所述培养基置于透明玻璃培养瓶中并给予光照12-14h/天，光照强度为1500-2000LX，温度为25℃±2℃。