[发明专利]用于ESC向外胚层前体细胞分化的培养基和培养方法有效
| 申请号： | 201710495111.8 | 申请日： | 2017-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN109112104B | 公开（公告）日： | 2022-08-02 |
| 发明（设计）人： | 张家文;张曦;孙长斌 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079;C12N5/0793 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 彭家恩;罗瑶 |
| 地址： | 518083 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 esc 向外 胚层 体细胞 分化 培养基 培养 方法 | ||
1.一种用于胚胎干细胞向外胚层前体细胞分化的培养基，其特征在于：所述培养基包含分化培养基；
所述分化培养基的基础培养基为RPMI-1640培养基，并且，所述分化培养基中含有第一试剂、第二试剂和第三试剂；
第一试剂为终浓度50ng/mL的Activin A，
第二试剂为终浓度3μM的A83-01，
第三试剂为终浓度5μM的Dorsomorphin；
所述外胚层前体细胞特异性表达基因PAX6、表面抗原CD56和蛋白Otx-2。
2.权利要求1所述的培养基在人胚胎干细胞向外胚层前体细胞分化中的应用，所述外胚层前体细胞特异性表达基因PAX6、表面抗原CD56和蛋白Otx-2。
3.权利要求1所述的培养基在人胚胎干细胞向外胚层前体细胞分化并制备功能神经元、神经胶质细胞或少突胶质细胞中的应用，所述外胚层前体细胞特异性表达基因PAX6、表面抗原CD56和蛋白Otx-2。
4.一种胚胎干细胞向外胚层前体细胞分化的培养方法，其特征在于：包括以下步骤，
（1）对胚胎干细胞进行饲养层培养；
（2）胚胎干细胞饲养层培养至80%-90%融合时传代，进行无饲养层培养；
（3）无饲养层培养至30%-60%融合时，对其进行3-6天的分化培养，使得胚胎干细胞向外胚层前体细胞分化；
所述分化培养采用的培养基为分化培养基，所述分化培养基的基础培养基为RPMI-1640培养基，并且，所述分化培养基中含有第一试剂、第二试剂和第三试剂；
第一试剂为终浓度50ng/mL的Activin A，
第二试剂为终浓度3μM的A83-01，
第三试剂为终浓度5μM的Dorsomorphin；
所述饲养层培养采用的培养基为饲养层培养基，所述饲养层培养基为DMEM/F12培养基；饲养层培养基中含有培养基重量份5-30%的KOSR、1×L-Glutamine、1×MEM-NEAA、1×2-Mercaptoethanol和2-10ng/mL的bFGF；
所述无饲养层培养采用的培养基为无饲养层培养基，所述无饲养层培养基的基础培养基为mTeSR培养基，其中铺设覆盖有浓度为8-12mg/mL的BD Matrigel基质；
所述外胚层前体细胞特异性表达基因PAX6、表面抗原CD56和蛋白Otx-2。
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