[发明专利]来源于积雪草的蛋白及在制备山楂酸和科罗索酸中的应用

权利要求书

1.蛋白质，为如下任一：

(A1)氨基酸序列为序列表中的序列1的蛋白质；

(A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

(A3)与(A1)或(A2)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质；

(A4)在(A1)-(A3)中任一所限定的蛋白质的N端和/或C端连接标签后得到的融合蛋白。

2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。

3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为如下任一：

(B1)编码序列为序列表中序列2的第444-1871位所示的DNA分子；

(B2)在严格条件下与(B1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；

(B3)与(B1)或(B2)限定的DNA序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性，且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述核酸分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组微生物。

5.根据权利要求4所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组微生物，其特征在于：所述重组微生物是将所述核酸分子导入酿酒酵母后得到的。

6.羟化酶制剂或三萜2位α-羟化酶制剂，包含权利要求1所述蛋白质或权利要求2-5中任一所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组微生物。

7.应用，为如下(C)或(D)或(E)：

(C)权利要求1所述的蛋白质在如下任一中的应用：

C1)作为羟化酶或三萜2位α-羟化酶，或制备具有羟化酶或三萜2位α-羟化酶活性的产品；

C2)生产山楂酸和/或科罗索酸，或制备用于生产山楂酸和/或科罗索酸的产品；

C3)降解齐墩果酸和/或乌索酸，或制备用于降解齐墩果酸和/或乌索酸的产品；

(D)权利要求2或3所述的核酸分子或权利要求4或5所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组微生物在如下任一中的应用：

D1)制备权利要求1所述的蛋白质；

D2)制备具有羟化酶或三萜2位α-羟化酶活性的产品；

D3)生产山楂酸和/或科罗索酸，或制备用于生产山楂酸和/或科罗索酸的产品；

D4)降解齐墩果酸和/或乌索酸，或制备用于降解齐墩果酸和/或乌索酸的产品；

(E)权利要求6所述的羟化酶制剂或三萜2位α-羟化酶制剂在如下任一中的应用：

E1)生产山楂酸和/或科罗索酸，或制备用于生产山楂酸和/或科罗索酸的产品；

E2)降解齐墩果酸和/或乌索酸，或制备用于降解齐墩果酸和/或乌索酸的产品。

8.权利要求1所述蛋白质的制备方法，包括如下步骤：培养权利要求5所述的重组微生物，使所述核酸分子得以表达，得到含有权利要求1所述蛋白质的重组微生物培养物；从所述重组微生物培养物中分离得到所述蛋白质。

9.山楂酸和/或科罗索酸的制备方法，包括如下步骤：以齐墩果酸和/或乌索酸为底物用权利要求1所述的蛋白质进行催化反应得到山楂酸和/或科罗索酸。

10.山楂酸和/或科罗索酸的制备方法，包括如下步骤：将含有权利要求1所述蛋白质的编码基因的表达盒导入能产生齐墩果酸和/或乌索酸的受体生物细胞中，得到重组生物细胞；培养所述重组生物细胞，使权利要求1所述蛋白质的编码基因表达，得到表达所述蛋白质的细胞培养物；从所述表达所述蛋白质的细胞培养物中得到山楂酸和/或科罗索酸；所述受体生物细胞为微生物细胞、植物细胞或非人动物细胞。