[发明专利]小麦叶锈菌EST-SSR分子标记的引物组及其检测方法和应用有效
| 申请号： | 201710494404.4 | 申请日： | 2017-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN107058602B | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 杨文香;王志;张娜;刘大群 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 13120 石家庄国为知识产权事务所 | 代理人： | 申超平 |
| 地址： | 071001 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小麦 锈菌 est ssr 分子 标记 引物 及其 检测 方法 应用 | ||
1.一种小麦叶锈菌EST-SSR分子标记的引物组，其特征在于，所述引物组包括核苷酸序列SEQ ID No：1～74所示引物。
2.利用权利要求1所述的小麦叶锈菌EST-SSR分子标记的引物组对叶锈菌遗传多样性的检测方法，其特征在于，至少包括如下步骤：
(1)小麦叶锈菌全基因组DNA提取；
(2)PCR扩增：94℃预变性5min，然后94℃变性30s，55-59℃退火1min，72℃延伸1min，进行35个循环，72℃延伸2min，10℃保存；
(3)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测：取扩增产物，加入变性载样指示剂，在浓度为10％的聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，300V恒压电泳0.8-1.2h，然后银染显色；
(4)小麦叶锈菌遗传多样性检测：构建ESR-SSR标记0、1矩阵，用NTSYS–pc 2.10e软件进行非加权平均聚类分析。
3.如权利要求2所述的对叶锈菌遗传多样性的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：模板DNA 2μL，Taq DNA聚合酶1U，dNTPs 1.0mmol/L，上下游引物各1.5μL，1×PCR缓冲液，用无菌蒸馏水补充反应体系至25.0μL。
4.如权利要求2所述的对叶锈菌遗传多样性的检测方法，其特征在于，所述电泳所用的缓冲液为0.5×TBE。
5.如权利要求2所述的对叶锈菌遗传多样性的检测方法，其特征在于，所述标记0表示相同迁移位置处无带，所述标记1表示相同迁移位置处有带。
6.如权利要求1所述的小麦叶锈菌EST-SSR分子标记的引物组在检测小麦叶锈菌群体遗传多样性中的应用。
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