[发明专利]一种腺苷脱氨酶活性测定方法及腺苷脱氨酶检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种测定腺苷脱氨酶活性的方法，同时本发明还涉及腺苷脱氨酶检测试剂盒，属于医学检验测定技术领域。该方法以腺苷为底物，以嘌呤核苷酸磷酸化酶、黄嘌呤脱氢酶为工具酶，使底物转化并脱氢，再还原氧化型辅酶生成还原型辅酶，在波长340nmnm下检测还原型辅酶Ⅰ生成量，来计算酶反应速率。本发明反应步骤少，使用原料种类少，试剂稳定性好，好线性范围宽，灵敏度高，准确度好，便于推广。

技术领域

本发明涉及一种测定腺苷脱氨酶活性的方法，同时本发明还涉及腺苷脱氨酶检测试剂盒，属于医学检验测定技术领域。

背景技术

腺苷脱氨酶是一种巯基酶，是细胞核代谢中，嘌呤核苷酸分解代谢过程中的一个关键性的酶，催化腺嘌呤核苷酸氧化分解，最终生成尿酸，随尿排出体外。在人体中腺苷脱氨酶主要来源于淋巴细胞，由肝脏代谢。测定血液、体液中的腺苷脱氨酶水平对肝病、血液病及免疫系统疾病的诊断、鉴别诊断、治疗都很重要，作为肝功能常规检查项目之一，与肝酶谱检测能全面地反映肝脏病的酶学改变。其它见于白血病的化疗期，有些癌症，溶血性贫血，良、恶性胸腹水的鉴别，一些自身免疫性疾病等等。

腺苷脱氨酶检测方法种类繁多，历史沿革已经历了四代方法，早期是用腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷酸水解，产生次黄嘌呤和氨，然后用终点法或速率法测定反应过程中产生氨的量，从而计算血清腺苷脱氨酶活性单位。所需试剂易配制，仪器简单，但试剂稳定性差，但灵敏度低，易受外源性和内源性NH₃影响，空白过高，精密度、准确度差。

现在市面上普遍采用第四代方法，反应原理如下：

腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基生成次黄苷，次黄苷在黄嘌呤核苷酸磷酸化酶作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶作用下生成尿酸和过氧化氢，过氧化氢被过氧化物酶分解产生原子氧，氧化苯胺类显色剂和4-氨基安替比林反应生成有色醌，显色强度与腺苷脱氨酶活力成正比。该方法灵敏度高，线性范围宽，试剂稳定性好，广受市场欢迎，是目前普遍使用的方法，但是，该方法的反应步骤多，所用的酶和显色剂多，随着时间变化，试剂空白会因显色剂的缓慢氧化而增高，试剂成本也高。

另外还有许多发明的方法，申请号200410041906.4，200410041907.9，200410065300.4，200410065601.7等，采用的方法反应步骤多，内外干扰因素多，各种工具酶价格很高，有些酶市面上没有供应，很难操作。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提出一种可以克服以上现有技术缺点的腺苷脱氨酶活性的测定方法，同时给出用以实现该方法的腺苷脱氨酶检测试剂盒。反应步骤少，使用原料种类少，试剂稳定性好，好线性范围宽，灵敏度高，准确度好，便于推广。

本发明测定腺苷脱氨酶活性的方法步骤如下：

1)、将样品与主要由腺苷、磷酸盐、嘌呤核苷磷酸化酶、氧化型辅酶、黄嘌呤脱氢酶组成的试剂混合，使之发生如下反应：

2)、检测最终反应物在主波长340nm吸光度上升的速度，测算出腺苷脱氨酶的活性大小。

被测样品与试剂的比例控制在1/10到1/100。