[发明专利]Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测的通用引物、探针及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域中的病毒检测方法，具体涉及一种Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测的通用引物、探针及其检测方法和应用。

背景技术

菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)病毒属于双生病毒科(Geminiviridae)，是一类重要的植物病毒。系统发育分析发现，侵染甘薯的Begomovirus病毒明显与其它植物的病毒处于不同的分支，具有较大差异，因此被称为“Sweepoviruses”。目前，侵染甘薯的Sweepoviruses总共包括11个种，分别为：sweet potato leaf curl China virus(SPLCCNV)、sweet potato leaf curl virus(SPLCV)、sweet potato leaf curl Georgia virus(SPLCGV)、sweet potato leaf curl Canary virus(SPLCCV)、sweet potato leaf curl Sao Paulo virus(SPLCSPV)、sweet potato leaf curl South Carolina virus(SPLCSCV)、sweet potato leaf curl Uganda virus(SPLCUV)和sweet potato mosaic virus(SPMV)、sweet potato leaf curl Henan virus(SPLCHnV)、sweet potato leaf curl Sichuan virus 1(SPLCSiV1)、sweet potato leaf curl Sichuan virus 2(SPLCSiV2)。研究表明，我国甘薯上的Sweepoviruses至少有7个种，分别为：SPLCCNV、SPLCV、SPLCGV、SPLCCV、SPLCHnV、SPLCSiV1、SPLCSiV2。

Sweepoviruses是侵染甘薯的一类重要病毒，一般可引起11-86％的产量损失，对甘薯生产危害很大。目前对Sweepoviruses尚无特别有效的化学防治方法，对这类病毒的早期检测和预警以及种植脱毒甘薯是防治Sweepoviruses最有效的方法。在对病毒监测预警和培育脱毒甘薯的过程中，都需要对Sweepoviruses病毒进行定量检测，只有尽早发现病毒或种植经过严格检测不含Sweepoviruses病毒的种薯种苗才能有效控制病害的发生，否则会引起产量损失和病毒的流行和扩散蔓延。目前对Sweepoviruses的检测主要采用普通PCR方法，但普通的PCR方法不能对病毒进行定量分析，而且灵敏度较低，容易引起漏检。实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)技术是一种新型核酸定性、定量技术，既有普通PCR灵敏快速的特点，又可实时监测，已应用于多种植物病毒的检测。但是目前尚无Sweepoviruses实时荧光定量PCR检测方法的研究报道。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测的通用引物、探针及其检测方法和应用。该方法能够简便、快速、灵敏的对Sweepoviruses病毒进行定量检测。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测的通用引物及探针，所述的引物包括上游引物SPV-F和下游引物SPV-R，其中SPV-F的序列为5’-ccctacactgggaatgctgt-3’，SPV-R的序列为5’-tgtgggacatccatcttgaa-3’；所述的探针为SPV-probe，SPV-probe的序列为5’-FAM-atacctaaggggtgtgtgggtccctgt-BHQ-3’。

一种利用所述的通用引物及探针的Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测方法，具体为，提取待测样品的总DNA，以总DNA为模板，利用通用引物及探针进行实时荧光定量PCR扩增，根据扩增结果，判定样品是否感染Sweepoviruses病毒。

所述的实时荧光定量PCR的反应体系为20μL，包括：Premix ExTaq(Probe qPCR)10μL、ROX Reference DyeII 0.4μL、10μmol/L SPV-F 0.4μL、10μmol/L SPV-R 0.4μL、10μmol/L SPV-probe 0.6μL、模板2μL，余量为ddH₂O。