[发明专利]Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测的通用引物、探针及其检测方法在审
| 申请号： | 201710488972.3 | 申请日： | 2017-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN107217108A | 公开（公告）日： | 2017-09-29 |
| 发明（设计）人： | 张振臣;赵晓立;王爽;田雨婷;王永江;乔奇;秦艳红;张德胜 | 申请（专利权）人： | 河南省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 郑州市华翔专利代理事务所(普通合伙)41122 | 代理人： | 张爱军,徐文婷 |
| 地址： | 450002 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | sweepoviruses 病毒 实时 荧光 定量 pcr 检测 通用 引物 探针 及其 方法 | ||
1.一种Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测的通用引物及探针，其特征在于，所述的引物包括上游引物SPV-F和下游引物SPV-R，其中SPV-F的序列为5’-ccctacactgggaatgctgt-3’，SPV-R的序列为5’-tgtgggacatccatcttgaa-3’；所述的探针为SPV-probe，SPV-probe的序列为5’-FAM-atacctaaggggtgtgtgggtccctgt-BHQ-3’。
2.一种利用权利要求1所述的通用引物及探针的Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，提取待测样品的总DNA，以总DNA为模板，利用通用引物及探针进行实时荧光定量PCR扩增，根据扩增结果，判定样品是否感染Sweepoviruses病毒。
3.根据权利要求2所述的Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述的实时荧光定量PCR的反应体系为20μL，包括：Premix ExTaq(Probe qPCR)10μL、ROX Reference DyeII 0.4μL、10μmol/L SPV-F 0.4μL、10μmol/L SPV-R 0.4μL、10μmol/L SPV-probe 0.6μL、模板2μL，余量为ddH2O。
4.根据权利要求2所述的Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述的实时荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性20s；95℃变性5s、58℃退火30s、72℃延伸30s，共40个循环。
5.根据权利要求2-4任一项所述的Sweepoviruses病毒实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，所述的实时荧光定量PCR扩增反应后，得到的实时荧光定量PCR的标准曲线为Y＝3.261X+40.967，扩增效率为102.603％，相关系数为0.999。
6.一种权利要求1所述的通用引物及探针在检测Sweepoviruses病毒中的应用。
7.一种权利要求2-4任一项所述的实时荧光定量PCR检测方法在检测Sweepoviruses病毒中的应用。
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