[发明专利]用于检测缺失型α-地中海贫血的引物组及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测缺失型α‑地中海贫血的引物组及试剂盒，属于分子生物学。所述引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.9所示的3.7F/3.7R；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的SEAF/SEAR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的THAIF/THAIR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的4.2F/4.2R；以及上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的APF/APR。本发明的引物组可应用于常见缺失型地中海贫血的检测，具有快速、灵敏、安全等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种检测缺失型α地中海贫血技术，特别是涉及一种直接PCR(Direct PCR)法单管同时检测缺失型(--^SEA、--^THAI、-α^3.7和-α^4.2)α地中海贫血的试剂盒。

背景技术

地中海贫血(thalassemia,简称地贫)，由于珠蛋白基因的缺陷(基因突变或缺失)导致一种或几种珠蛋白肤链合成障碍，而引起血红蛋白的α-链/非α-链比例失衡，进而导致血红蛋白不稳定，冗余的珠蛋白链沉积在红细胞膜上，红细胞膜的通透性和脆性发生改变，导致溶血性贫血，临床上表现出症状轻重不一的慢性进行性溶血性贫血；是一种隐性基因遗传病。根据受累的珠蛋白肽链的类型分为α、β、γ、δ和δβ地贫等类型。其中以α、β地贫最为常见，危害也最大。广泛发生于热带和亚热带国家，我国长江以南发病率高，无明显症状的携带者超过人群20％。

α珠蛋白基因位于α珠蛋白基因簇，该基因簇的染色体定位为16p13.3，基因簇中，有Hb Z,Hbα1,Hbα2三个功能基因，表达相应的ζ(HBZ基因)和α(HBα1和HBα2基因)珠蛋白链，其再与相应的β珠蛋白链结合，形成ζ2γ2(胎儿期血红蛋白Hb Portland)和α2β2:(成人血红蛋白HbA)。α-地贫，是由于α珠蛋白基因缺失或缺陷导致α珠蛋白肽链合成障碍所致。地贫具高度的遗传异质性。α地贫可以分为缺失型和非缺失型两大基因类型。95％以上为缺失型，是由于α珠蛋白基因大片段缺失所致。相对人类正常基因组而言，α珠蛋白簇的基因型为ζ₂/α2₂/α1₂，有4个α珠蛋白基因，一条染色体上缺失或缺陷1个α基因，为α⁺地贫(静止型)，通常缺失一个α基因或一个α基因发生点突变或少数几个碱基的缺失或插入引起(-α/，α^Tα)，表现为α-珠蛋白肽链合成部分受阻，我国最常见的α⁺地贫基因为-α^3.7、-α^4.2缺失型突变以及Hb WS,Hb QS与Hb CS等点突变。缺失2个α基因，为α⁰地贫(标准型)，特点为α-珠蛋白肽链合成完全受阻，我国最常见的为--^SEA，少见--^THAI，而--^FIL则更罕见。缺失3个αl或/和α2基因的为HbH病，4个α珠蛋白基因均缺失的为Hb Bart's胎儿水肿综合征。当夫妇双方均为她中海贫血基因缺失携带者时，其后代有25％的机会罹患Hb Bart's或HbH病。HbH病患者中至重度贫血，可丧失劳动力，严重影响生存质量；Hb Bart's水肿胎受累患儿因严重缺氧而胎死腹中或一出生即死亡，引起的产科并发症给产妇带来极大的身心伤害；最常见的是α⁰-地贫复合α⁺地贫的缺失型Hb H病，然而非缺失型的Hb H病也占有相当的比例,这类病人比那些缺了3个α珠蛋白基因所表现出来的临床症状更严重，贫血更严重。这些都给家庭和社会造成巨大压力。

α地贫目前该病尚无理想的治疗方法，研究表明在地贫高发区，对夫妇双方均为地贫基因携带者的孕妇在妊娠早期筛查或中期应用相应分析技术通过遗传筛查和产前基因诊断选择性地淘汰重症α-地贫胎儿则是控制该病发生的首要途径和有效预防措施。因此，对于缺失型α-地贫的检测急需一种简单、能快速准确基因分型的技术手段。