[发明专利]用于检测缺失型α-地中海贫血的引物组及试剂盒

权利要求书

1.用于检测缺失型α-地中海贫血的引物组，包括如下引物对：

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.9所示的3.7F/3.7R；

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的SEAF/SEAR；

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的THAIF/THAIR；

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的4.2F/4.2R；

以及上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的APF/APR。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述检测指以人体血液、和/或体液、和/或胚胎的遗传物质、和/或人体基因组DNA为模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳即可获知结果。

3.用于快速检测缺失型α-地中海贫血的试剂盒，包括权利要求1所述的引物组。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述快速检测指，直接以人体血液和/体液或和/或胚胎的遗传物质为模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳即可获知结果。

5.根据权利要求2-4任一所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于进行PCR和/或电泳的试剂。

6.根据权利要求2-5任一所述的试剂盒，其特征在于，所述用于进行PCR的试剂包括引物、dNTP、DNA聚合酶、缓冲液、双蒸水、MgCl₂；

所述用于进行电泳的试剂包括琼脂糖、蒸馏水、核酸染料；

所述核酸染料选自：EB、GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根据权利要求2-5任一所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR的反应体系为：1～4μl模板、各引物：0.1～1μmol/L、MgCl₂浓度为1.5～5mM/L、dNTP的浓度为100～500μM/L、DNA聚合酶的浓度为1～4U/反应；

优选地，所述PCR反应体系包含如下体积份数的各组分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、APF/3.7F 0.1-1.2份、APR 0.1-0.8份、4.2F 0.1-0.6份、4.2R0.1-0.6份、3.7R 0.1-0.6份、SEA-F 0.1-0.6份、SEA-R 0.1-0.6份、THAI-F 0.1-0.6份、THAI-R 0.1-0.6份、模板+超纯水2.8-9份；

进一步优选地，所述PCR反应体系如下：MightyAmp Taq 0.5μl、2×MightyAmp Buffer10μl、APF/3.7F 0.9μl、APR 0.5μl、4.2F 0.3μl、4.2R 0.3μl、3.7R 0.4μl、SEA-F 0.2μl、SEA-R 0.2μl、THAI-F 0.2μl、THAI-R 0.2μl、模板+超纯水6.3μl；

优选地，所述引物组中各引物摩尔浓度比例为：

APF/3.7F∶APR∶4.2F∶4.2R∶3.7R∶SEA-F∶SEA-R∶THAI-F∶THAI-R＝9∶5∶3∶3∶4∶2∶2∶2∶2；

所述PCR的反应程序为：95℃5-8分钟；以94℃30秒、61℃～64℃45秒～1分钟、72℃130秒为1个循环，进行31～34个循环；72℃8分钟；12℃12秒；

所述电泳指，将所述PCR反应产物置于添加了质量比为0.8～1.5％的琼脂糖凝胶中，在5V/cm电压下电泳40～55分钟；所述琼脂糖凝胶中添加有体积比0.005％的核酸染料。