[发明专利]阿尔茨海默病老年斑纳米靶向磁共振诊断对比剂及制备方法

权利要求书

1.一种阿尔茨海默病老年斑纳米靶向磁共振诊断对比剂，其特征在于：所述诊断对比剂包括有效量的诊断物Tat-PTD-USPIO-Aβ_16-20和生理可接受的水；所述诊断物Tat-PTD-USPIO-Aβ_16-20由超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO和负载在超顺磁性纳米氧化铁颗粒上的两个短肽组成，且两个短肽分别人体免疫缺陷病毒HIV-1的转录活化因子肽段HIV-1Tat肽段和Aβ_16-20肽段，其中，转录活化因子肽段的氨基酸序列为：GRKKRRQRRRPPQ，Aβ_16-20肽段的氨基酸序列为：KLVFF。

2.根据权利要求1所述阿尔茨海默病老年斑纳米靶向磁共振诊断对比剂，其特征在于：所述超顺磁性纳米氧化铁颗粒的粒径为6～10nm。

3.根据权利要求1所述阿尔茨海默病老年斑纳米靶向磁共振诊断对比剂，其特征在于：所述诊断对比剂中，以铁元素含量计量该诊断对比剂中诊断物Tat-PTD-USPIO-Aβ_16-20的浓度为：其铁元素含量为0.01-20摩尔/升。

4.根据权利要求1所述阿尔茨海默病老年斑纳米靶向磁共振诊断对比剂，其特征在于：所述诊断物Tat-PTD-USPIO-Aβ_16-20的粒径为50-65nm。

5.一种权利要求1所述阿尔茨海默病老年斑纳米靶向磁共振诊断对比剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)利用水向共沉淀法制备葡聚糖包覆的超顺磁性纳米氧化铁颗粒：

a.将2-5重量份的葡聚糖溶解于5-10重量份的蒸馏水中，得到葡聚糖溶液；

b.将1-3重量份的FeCl₃和1-4重量份的FeCl₂溶于2-4重量份蒸馏水中，得到铁离子溶液；

c.将上述葡聚糖溶液和铁离子溶液混合均匀，并在惰性气体环境下磁力搅拌30-60mins，得到初级混合液，在温度为4～10℃，按体积比为1：2～4向初级混合液中以33-60滴/秒的速度滴加浓度为0.1-0.25mol/L的氨水；氨水滴加完毕后升温至60-70℃并继续磁力搅拌90-120mins；然后往制备好的葡聚糖覆的纳米氧化铁颗粒；

2)表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO的制备：

a.制备好的葡聚糖包覆的纳米氧化铁颗粒中加入絮凝剂，在8000-9000转/min条件下离心10-20min，弃去上清液，得到沉淀物；

b.将沉淀物分散于蒸馏水中，得到含有超顺磁性纳米颗粒的混合溶液；

c.取2-4体积份的含有超顺磁性纳米颗粒的混合溶液与10-15体积份的含NaBH₄的NaOH溶液在室温下混合均匀，在惰性气体环境下升温至60-70℃，边搅拌边加入3-5体积份的表氯醇，反应约10-12小时后取下，加入絮凝剂，离心，重新分散，洗涤三至五次后，重新分散于蒸馏水中；得到分散液；

d.向分散液5-10体积份的乙二胺，反应10-12小时后取下，加入絮凝剂，离心，洗涤后重新分散于pH值为7.4-8的磷酸缓冲溶液中，形成含有表官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO的溶液；

3)交联剂溶液与磷酸盐溶液的混合液制备

按重量/体积比5～10:1～2mg/mL将3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯SPDP溶于二甲基亚砜中，得交联剂溶液，再将该交联剂溶液与浓度为0.1-0.2mol/L、pH＝7.4-8的磷酸盐缓冲溶液混合，得到交联剂溶液与磷酸盐溶液的混合液；

4)超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO的交联

向3～5体积份的含有表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO的溶液加入步骤3)得到的2～3体积份的混合液中，在室温下放置60～120分钟，置于超滤管中，6000-8000转/分离心50-60分钟，过滤去除杂质和未反应的交联剂溶液，得到经交联液处理过的表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO磷酸盐溶液；其中超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO磷酸盐溶液中，超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO含量为1.0-2.5mg/mL；

5)诊断对比剂的制备

分别称取1-2体积份的浓度为0.02mol/L的N-羟基琥珀酰亚胺NHS溶液和1-2体积份的浓度为0.2mol/L的3-二甲胺基丙基碳二亚胺EDC溶液，并加入上述3-5体积份交联溶液处理过的表面官能化的超顺磁性纳米氧化铁颗粒USPIO磷酸盐溶液中，在温度为35～40℃条件下放置30-90分钟，然后再加入3-5重量份的人体免疫缺陷病毒HIV-1的转录活化因子肽段HIV-1Tat肽段和3-5重量的份Aβ_16-20肽段，混合后室温下放置10-12小时；置于超滤管中，6000-8000转/分离心40-60分钟，过滤去除杂质和未反应的成分，管中即为水相的诊断对比剂，诊断对比剂包括有效量的诊断物Tat-PTD-USPIO-Aβ_16-20和生理可接受的水。