[发明专利]一种唾液样本中痕量大麻的检测方法及使用的SPR芯片

说明书

技术领域

本发明涉及一种毒品大麻的检测方法，尤其涉及一种唾液样本中痕量大麻的检测方法及其使用的SPR芯片，属于检测技术领域。

本发明中下列表达式的意义为：

THC：四氢大麻酚

KLH：血蓝蛋白

OVA：鸡卵白蛋白

背景技术

大麻，其主要有效化学成份为THC，在吸食或口服后有精神和生理的活性作用，被认为是世界三大毒品之一，社会危害性非常严重。

目前，针对大麻的检验方法主要包括常规化学法、毛细管电泳法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱/ 质谱法、免疫检测法和生物检测法等。其中体内检材分析是当下法庭科学研究的热点，尿液是检测分析滥用毒品应用最为广泛的体内检材。但是，现有的尿检技术不能满足犯罪现场快速检测的需求，在此背景下，寻求一种可达到快速、准确、灵敏、经济的犯罪现场检测方法成为了科学工作者研究重点。

表面等离子共振技术(SPR)是从20世纪90年代发展起来的一种新技术，其应用SPR原理检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况，广泛应用于各个领域，已经成为生命科学和制药领域的一种重要的研究工具。与传统检测方法相比，具有高灵敏度、响应快、体积小、机械强度大、检测过程快、实时检测、能动态地监测生物分子相互作用的全过程和实时数据、无需标记样品、保持分子活性、对复合物的定量测定不干扰反应的平衡等优点，成为了检测大麻的较优选择。目前，关于使用表面等离子共振技术快速检测大麻的方法尚未见报道。中国发明专利(公开号：CN102057277A)公开了一种大麻使用的检测，该专利采用的是基于结合伴侣的非竞争性同源性免疫测定的时间分辩荧光共振能量转移(TR-FRET)分析；应用基因工程方法制备能够结合四氢大麻酚(THC)和抗-THC-抗体之间的免疫复合物的抗体片段。结合伴侣均须进行荧光标记，以便实现荧光计的 TR-FRET荧光检测，检测灵敏。另外，中国发明专利(公开号： CN101580544A)公开了一种胶体金标记大麻、四氢大麻酚单抗免疫检测板，该专利描述了THC-KLH的制备；以THC-KLH为抗原，采用弗氏佐剂法(Freund’s adjuvant)免疫BALB/C小鼠；用单克隆抗体技术制备杂交瘤；用THC-KLH包被的酶联板(ELISA 法)筛选出抗THC的杂交瘤细胞。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提出了一种利用唾液样本就可达到快速、准确的痕量大麻的检测方法。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：一种唾液样本中痕量大麻的检测方法，所述检测方法为利用SPR芯片在SPR仪上检测待测样本中的THC含量，所述SPR芯片为抗THC抗体SPR 芯片，所述抗THC抗体SPR芯片通过以下方法制得：

S1、将THC分别偶联于KLH和OVA，得到THC-KLH和 THC-OVA；

S2、用上述THC-KLH和快速免疫佐剂免疫BALB/C小鼠，用THC-OVA检测免疫小鼠抗THC的抗血清效价；

S3、取抗血清ELISA效价在6K以上的小鼠，取脾脏的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合，经单克隆筛选获得抗血清 ELISA效价在10K以上的抗THC抗体杂交瘤细胞株；

S4、将上述杂交瘤细胞株接种至BALB/C小鼠腹腔，从腹水中制备纯化抗体；

S5、用本瓜蛋白酶将上述纯化抗体水解成Fc段和Fab段，将Fab段包被于3D环氧SPR芯片，获得抗THC抗体SPR芯片。

在上述的一种唾液样本中痕量大麻的检测方法中，步骤S2 中所述的快速免疫佐剂为QuickAntibody-Mouse5W。

在上述的一种唾液样本中痕量大麻的检测方法中，步骤S2 中所述的THC-OVA检测在THC-KLH和快速免疫佐剂免疫 BALB/C小鼠5周后进行，进一步优选5-8周后进行，以便获得更高效的亚克隆细胞株。