[发明专利]用于基因分型检测α与β地中海贫血的引物组、芯片及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于检测α与β地中海贫血的引物组，属于分子生物学领域。所述引物组包括α引物组，和β引物组；本发明还提供了可同时检测α与β地中海贫血的芯片，所述芯片上固定有如SEQ ID NO：1‑31所示序列的探针的芯片；基于所述引物组和芯片，本发明还提供了可同时检测α与β地中海贫血的试剂盒。本发明试剂盒具备检测时间短、成本低、操作方便，闭管操作，减少污染，对开展地贫人群筛查，遗传咨询和产前诊断具有重大的意义。

技术领域

本发明属于分子生物学医药领域，涉及一种检测α与β地中海贫血技术，特别是涉及一种直接PCR(Direct PCR)结合杂交技术同时检测7种α地中海贫血突变和19种点突变β地中海贫血的试剂盒。

背景技术

地中海贫血(thalassemia,简称地贫)，是是由于α或β珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白链合成障碍，造成α链与β链的比例失去平衡，相对过剩的链呈游离状态，进而导致血红蛋白不稳定，冗余的珠蛋白链沉积在红细胞膜上，容易氧化变性，红细胞膜的通透性和脆性发生改变，导致溶血性贫血，临床上常表现出症状轻重不一的慢性进行性溶血性贫血。并且根据受累的珠蛋白肽链的类型分为α、β、γ、δ和δβ地贫等类型。其中以α、β地贫最为常见，危害也最大。广泛发生于热带和亚热带国家及我国长江以南地区。

α-地中海贫血(以下简称α-地贫)是由于α-珠蛋白基因缺失或点突变而致α-珠蛋白链合成障碍的疾病，具高度的遗传异质性。95％以上为缺失型，是由于α珠蛋白基因大片段缺失所致。就人类正常基因组而言，a珠蛋白簇的基因型为ζ₂/α2₂/α1₂，有4个α珠蛋白基因，一条染色体上缺失或缺陷1个α基因，为α⁺地贫(静止型)，通常缺失一个α基因或一个α基因发生点突变或少数几个碱基的缺失或插入引起(-α/，α^Tα)，表现为α-珠蛋白肽链合成部分受阻，我国最常见的α⁺地贫基因为-^3.7、-^4.2缺失型突变以及Hb WS,Hb QS与Hb CS等点突变。缺失2个α基因，为α⁰地贫(标准型)，特点为α-珠蛋白肽链合成完全受阻，,我国最常见的为--^SEA，少见--^THAI，而--^FIL则更罕见。缺失3个αl或/和α2基因的为HbH病，4个α珠蛋白基因均缺失的为Hb Bart's胎儿水肿综合征。当夫妇双方均为她中海贫血基因缺失携带者时，其后代有25％的机会罹患Hb Bart's或HbH病。HbH病患者中至重度贫血，可丧失劳动力，严重影响生存质量；Hb Bart's水肿胎受累患儿因严重缺氧而胎死腹中或一出生即死亡，引起的产科并发症给产妇带来极大的身心伤害；最常见的是α⁰-地贫复合α⁺地贫的缺失型Hb H病，然而α2-珠蛋白基因发生非缺失型突变的纯合子或复合杂合子会引起重度贫血的Hb H病也占有相当的比例,这类病人比那些缺了3个α珠蛋白基因所表现出来的临床症状更严重，贫血更严重。这些都给家庭和社会造成巨大压力。

β珠蛋白基因簇位于人体11号染色体的短臂上，包括ε、Gr、Ar、δ和β珠蛋白基因及2个假基因，总长度约为50Kb。β珠蛋白肤链是由β珠蛋白基因所编码的146个氨基酸组成。β地中海贫血的主要分子病理学基础是β珠蛋白基因的点突变及小的插入或缺失，包括β珠蛋白基因的启动子序列突变或增强子突变都可引起β珠蛋白生成障碍性贫血,导致β珠蛋白基因转录、hnRNA加工或mRNA翻译异常引起，而相对过剩的α珠蛋白肤链的存在是β地中海贫血发生溶血、贫血和无效造血的根本原因。β珠蛋白基因含2个内含子及3个外显子。在其外显子1、外显子2、内含子1及3’端调控区集中了中国人群中发现的大部分突变。目前在全世界己报道约170种左右的β珠蛋白基因的突变类型，我国己发现至少有28种此类突变，最主要的有6种CD41-42，CD17，IVS-2nt654,TATAbox-28,CD71-72及CD26占中国人β地中海贫血突变基因总数的90％以上。