[发明专利]用于基因分型检测α+缺失型地中海贫血的引物组及试剂盒

权利要求书

1.用于基因分型检测α⁺缺失型地中海贫血的引物组，包括如下引物对：

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的3.7F/3.7R；

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的DPAIC-F/DPAIC-R；

上下游引物序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的4.2F/4.2R。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述检测指以人体体液和/或人体基因组DNA为模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳即可获知结果。

3.用于快速检测α⁺缺失型地中海贫血基因型的试剂盒，包括权利要求1所述的引物组。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述快速检测指，直接以人体体液为PCR反应的模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳即可获知结果。

5.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于进行PCR和/或电泳的试剂。

6.根据权利要求2-4任一所述的试剂盒，其特征在于，所述用于进行PCR的试剂包括dNTP、DNA聚合酶、缓冲液、双蒸水、MgCl₂；

所述用于进行电泳的试剂包括琼脂糖、蒸馏水、核酸染料；

所述核酸染料选自：EB、GelGreen、SYBR GreenⅠ、GoldView、GelRed和GelGreen。

7.根据权利要求2-5任一所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR的反应体系为：模板1～4μl；各引物：0.1～1μmol/L；MgCl₂浓度为1.5～5mM/L；dNTP的浓度为100～500μM/L；DNA聚合酶的浓度为1～4U/反应；

所述PCR的反应体系优选包括下述体积份数的各组分：MightyAmp Taq 0.1-1份、2×MightyAmp Buffer 10份、DPAIC-F/3.7F 0.1-1份、DPAIC-R 0.1-1份、4.2F 0.1-1、4.2R0.1-1份、3.7R 0.1-1份、模板+超纯水 4-9.4份；

所述PCR的反应体系进一步优选包括下述体积份数的各组分：MightyAmp Taq 0.5份、2×MightyAmp Buffer 10份、DPAIC-F/3.7F 0.5份、DPAIC-R 0.3份、4.2F 0.2份、4.2R 0.2份、3.7R 0.2份、模板+超纯水 8.1份；

优选的，所述引物组各引物摩尔浓度比例如下：

DPAIC-F/3.7F∶DPAIC-R∶4.2F∶4.2R∶3.7R＝5∶3∶2∶2∶2；

所述PCR的反应程序为：95℃8～12分钟；以95℃15～30秒，60-66℃35～70秒，72℃90-180秒为1个循环，进行30～35个循环；72℃8分钟；

所述PCR的反应程序优选为：95℃5min；以94℃30sec、63℃～65℃45sec～1min、72℃130sec为1个循环，进行32个循环；72℃8min、12℃12sec；

所述电泳指，将所述PCR反应产物置于质量比为0.8～1.5％琼脂糖凝胶中，在5V/cm电压下电泳约40～55分钟；所述琼脂糖凝胶中还添加有体积比0.005％核酸染料。

8.根据权利要求4或7所述的试剂盒，其特征在于，所述模板还包括固定在固体载体上的人体血液、和/或体液、和/或基因组DNA、和/或胚胎遗传物质；

优选地，所述模板可以选自滤纸片干血斑样品、滤纸片干羊水样品、滤纸片干浆膜腔液样品、滤纸片干关节液样品、滤纸片干唾液样品、滤纸片干基因组DNA样品、和/或滤纸片干胚胎遗传物质样品。