[发明专利]测定样本中的小而密低密度脂蛋白胆固醇的方法及试剂

说明书

本发明公开一种测定样本中小而密低密度脂蛋白胆固醇的方法及试剂，其特征在于：(1)在胆固醇酯酶和离子选择剂的存在下，先消除样本中除sdLDL‑C以外的脂蛋白中的胆固醇；(2)定量检测步骤(1)处理后剩余的sdLDL‑C。利用离子选择剂来选择性消除小而密低密度脂蛋白胆固醇以外的脂蛋白，进而检测小而密低密度脂蛋白胆固醇。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种测定样本中的小而密低密度脂蛋白胆固醇的方法及试剂。

背景技术

众所周知，按照脂蛋白的分类，可以将脂蛋白分为乳糜微粒(CM)，极低密度脂蛋白(VLDL)，中间密度脂蛋白(IDL)，低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。临床上，通常测定各类脂蛋白的胆固醇含量，用于指导诊断。其中低密度脂蛋白胆固醇是动脉粥样硬化的危险因素，已广泛地用于临床检测。但越来越多的研究表面，低密度脂蛋白具有异质性，其中一部分密度较大体积较小的部分称为小而密低密度脂蛋白(sdLDL)，另一部分密度较小体积较大的部分称为大而轻低密度脂蛋白(LLDL)，这两类脂蛋白对引发动脉硬化的能力不同。其中sdLDL具有更高的致动脉硬化的风险，因此在临床上对于该小而密LDL 的分级测定具有重要意义。由于临床上检测脂蛋白时，经常检测的是脂蛋白中的胆固醇，因此有价值的检测对象应该为小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)。

目前，用于sdLDL-C测定的方法有超速离心法、电泳法、HPLC法。然而超速离心法虽然检测结果准确，但需要特殊设备，且操作时间长，不适合常规临床实验室应用；电泳法的分辨率有限，且操作步骤较多，亦不适合常规检测；HPLC法需要特殊设备，且分辨率不高，测试时间也不短，因此也不适合用于常规检测。

此外，已经有关于利用生化仪进行均相检测sdLDL-C的报道，如电化生研株式会社的均相法检测(CN200880013083.0，CN200880121086.6)，是利用表面活性剂和磷脂酶先选择性消除sdLDL-C以外的脂蛋白，再对剩余的sdLDL-C进行反应，进而检测sdLDL-C含量。而本发明则提供了另外一种技术手段，即利用离子选择剂来选择性消除sdLDL-C以外的脂蛋白，进而检测sdLDL-C。

发明内容

本发明提供一种采用利用离子选择剂来选择性消除小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)以外的脂蛋白(or脂蛋白胆固醇)，进而检测小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)的测定样本中的小而密低密度脂蛋白胆固醇的方法。

离子选择剂：是指由阴阳离子所构成，对某种物质具有选择性的物质，包括离子液体和离子聚合物。

离子液体：离子液体就是完全由离子组成的液体，是低温(100℃)下呈液态的盐，也称为低温熔融盐，它一般由有机阳离子和无机阴离子或有机阴离子所组成。离子液体的种类很多，大多数是由含氮的有机杂环阳离子和无机或有机阴离子构成。

离子聚合物：是一类在酸性或碱性介质中可产生解离，形成带正电荷或负电荷的高分子材料，又称聚电解质。

本发明人发现，当有离子选择剂存在的条件下时，能够提高胆固醇酯酶的底物催化特异性，使得对sdLDL-C以外的脂蛋白的反应速率明显大于sdLDL-C的反应速率，因此可以通过调节离子选择剂的浓度和胆固醇酯酶的用量，使sdLDL-C以外的脂蛋白胆固醇优先反应掉，并清除反应产物，再与sdLDL-C反应，从而检测出样本中sdLDL-C的含量。

因此，申请人基于上述创造性的技术成果，获得一种用于检测样本中小而密低密度脂蛋白胆固醇的方法，其特征在于，方法包括：

(1)在胆固醇酯酶和离子选择剂的存在下，先消除样本中除sdLDL-C以外脂蛋白中的胆固醇(除sdLDL-C以外脂蛋白中的胆固醇具体包括HDL-C、VLDL-C、CM-C以及大而轻LDL-C)；

(2)定量检测步骤(1)处理后剩余的sdLDL-C。