[发明专利]一种直接同时检测α与β地中海贫血的芯片、扩增试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种用于直接检测α-地中海贫血和β-地中海贫血突变位点的芯片，其特征在于，所述芯片上固定有：

用于检测三种非缺失α-地中海贫基因QS、CS、WS所对应的正常基因和突变基因位点的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO：26-31所示，

用于检测三种缺失α-地中海贫血基因--^SEA、-α^3.7与-α^4.2的特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO：32-34，

和/或用于检β-地中海贫血基因所对应的正常基因和突变基因位点特异性寡核苷酸探针，其碱基序列如SEQ ID NO：1-25所示。

2.根据权利要求1所述的基因芯片，其特征在于，所述芯片的基底材料选自：硝酸纤维素、醋酸纤维素、玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、聚丙烯膜和微缩磁珠组成的组。

3.一种用于直接PCR检测缺失α-地中海非贫血基因与β-地中海贫血基因的扩增试剂，其特征在于，包括如下核苷酸序列的引物组：

APF:SEQ ID NO：36；

APR：SEQ ID NO：37；

B1F：SEQ ID NO：38；

B1R：SEQ ID NO：39；

B2F：SEQ ID NO：40；

B2R：SEQ ID NO：41；

所述引物组扩增的特征序列与权利要求1或2所述的基因芯片中的用于检测三种非缺失α-地中海贫基因QS、CS、WS所对应的正常基因和突变基因位点的特异性寡核苷酸探针以及用于检测β-地中海贫血基因所对应的正常基因和突变基因位点特异性寡核苷酸探针特异性结合；

所述扩增试剂中加入其它PCR扩增组分，通过一次PCR反应对待测样品或提取自待测样品的DNA直接进行三种非缺失α-地中海贫基因QS、CS、WS与β-地中海贫血基因的检测；

所述待测样品选自新鲜采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反复冻融的陈旧性抗凝外周血、培养羊水细胞、绒毛、羊水、脐带血、末梢血、DBS样本和/或类似DBS处理的样本、唾液、胚胎的遗传物质包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋养外胚层细胞，即囊胚细胞、多个细胞或单个细胞等。

4.根据权利要求3所述的扩增试剂，其特征在于，用于一个反应的所述扩增试剂中，含有：

使用时，添加无菌蒸馏水与待测样品或提取自待测样品的DNA以达到20份体积。

5.根据权利要求3或4所述的扩增试剂，其特征在于，所述引物组中，各引物摩尔浓度比例为：

优选地，

所述用于一个反应的所述PCR扩增试剂中，含有

6.一种用于直接PCR检测缺失α-地中海贫血基因的扩增试剂，其特征在于：包括如下核苷酸序列所示的引物组，其扩增的特征序列与权利要求1或2所述的基因芯片中的用于检测三种缺失α-地中海贫血基因--^SEA、-α^3.7与-α^4.2的特异性寡核苷酸探针特异性结合：

SEAF:SEQ ID NO.42；

SEAR:SEQ ID NO.43；

4.2F:SEQ ID NO.44；

4.2R:SEQ ID NO.45；

3.7F:SEQ ID NO.46；

3.7R:SEQ ID NO.47。

所述扩增试剂中加入其它PCR扩增组分，通过一次PCR反应对待测样品或提取自待测样品的DNA直接进行所述三种缺失α-地中海贫血基因--^SEA、-α^3.7与-α^4.2的检测，所述待测样品选自新鲜采集的抗凝外周血、-20℃－-80℃保存未反复冻融的陈旧性抗凝外周血、培养羊水细胞、绒毛、羊水、脐带血、末梢血、DBS样本和/或类似DBS处理的样本、唾液、胚胎的遗传物质包括配子如精子或卵子、卵裂期胚胎的卵裂球、囊胚滋养外胚层细胞，即囊胚细胞、多个细胞或单个细胞等。