[发明专利]一种银杏的组织培养方法及生根培养基

说明书

技术领域

本申请涉及组织培养技术领域，尤其涉及一种银杏的组织培养方法及生根培养基。

背景技术

银杏为银杏科、银杏属落叶乔木，是我国特有树种，银杏出现在几亿年前，是第四纪冰川运动后遗留下来的裸子植物中最古老的孑遗植物，现存活在世的银杏稀少而分散，上百岁的老树已不多见，和它同纲的所有其他植物皆已灭绝，所以银杏又有“活化石”的美称。银杏树枝生长较慢，寿命极长，自然条件下，从栽种到银杏结果要二十多年，四十年后才能大量结果。银杏具有绿化环境、净化空气、保持水土、防治虫害、调节气温、调节心理等功能，是良好的造林、绿化和观赏树种，对中国大江南北农林种植结构调整、平原农区林业的发展具有重要意义。现代研究表明，银杏叶提取物具有扩张血管、改善脑循环、抑制血小板活化因子等作用，还可开发成保健品、饮料、化妆品等，经济效益颇为可观。

随着市场的需求增加，人们对银杏栽培面积扩大，对银杏的繁殖需求也增大。现有技术中，银杏的繁殖方法主要有4种：播种、扦插、嫁接和植物组织培养。传统的播种方法容易发生性状分离导致银杏品质下降，扦插和嫁接受季节影响较大，并且繁殖速度相对较慢。

随着银杏药用价值的挖掘，对银杏的品质要求也越来越高，现代分子生物学的发展出现了植物组织培养的方法对植物进行无性繁殖，银杏组织培养既可以打破季节的影响也可以保持亲本优良性状，还可以通过优化条件加快繁殖速度以满足不同季节不同品质的需求。在银杏组织培养过程中，大多选择成熟胚诱导无菌苗，然后以无菌苗的胚轴或子叶为外植体，或者以银杏的腋芽为外植体，研究银杏芽的萌发、增殖和生根。在银杏组织培养的过程中常常出现很多问题，比如：由于银杏属木本植物，组织培养苗褐化比较严重；愈伤诱导率低；种子较大，容易污染等。

因此，在通过组织培养来促进银杏的繁殖的方法中，如何避免上述问题，成为本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

本申请提供一种银杏的组织培养方法及生根培养基，以解决现有的通过组织培养来促进银杏繁殖的技术中，组织培养苗褐化严重、容易污染的技术问题。

第一方面，本申请实施例提供一种银杏的组织培养方法，包括如下步骤：

制备MS培养基母液；所述MS培养基母液由大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液以及有机物母液组成；

配制浓度为1g/L的6-苄氨基嘌呤溶液和浓度为1g/L萘乙酸溶液；

分别以银杏树枝和银杏果壳为原料，制备得到银杏树枝活性炭和银杏果壳活性炭；

以琼脂、蔗糖、所述MS培养基母液、所述6-苄氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述银杏树枝活性炭或所述银杏果壳活性炭为原料，制备生根培养基；

取外植体，所述外植体为银杏侧芽带叶茎尖；

对所述外植体进行消毒处理；

将消毒处理后的所述外植体接种到所述生根培养基中；

将接种后的所述生根培养基置于500lux-1000lux光照、20℃-25℃环境下培养。

优选地，所述对外植体进行消毒处理的步骤包括：

将所述外植体置于洗衣粉水中浸泡1h-3.5h后，用流水冲洗5min-15min；

采用自来水，对流水冲洗后得到的外植体浸泡4-5次，每次5min；

将自来水浸泡后得到的外植体置于70％的乙醇溶液中浸泡0.75min-2min，并用无菌水冲洗3-4次，每次1min；

采用0.5％的新洁尔灭，对无菌水冲洗后得到的外植体处理8min-25min，并用无菌水冲洗3-4次，每次1min。

优选地，所述以琼脂、蔗糖、所述MS培养基母液、所述6-苄氨基嘌呤溶液和所述萘乙酸溶液，以及所述银杏树枝活性炭或所述银杏果壳活性炭为原料，制备生根培养基的步骤包括：

分别量取50mL所述大量元素母液、5mL所述微量元素母液、5mL铁盐母液和5mL有机物母液，混合得到MS培养基母液；

分别称取7g-8g琼脂、0-15g蔗糖，以及2g-10g所述银杏树枝活性炭或2g-10g所述银杏果壳活性炭，加入到所述MS培养基母液中，采用蒸馏水定容至1L；

向定容后的所述MS培养基母液中加入0.5mL-1.5mL所述6-苄氨基嘌呤溶液以及0.1mL-0.3mL所述萘乙酸溶液，加热搅拌至所述琼脂完全溶解，得到混合体；

将所述混合体的pH调节至5.2-5.8，分装到培养瓶中；

将所述培养瓶置于121℃下灭菌30min，得到生根培养基。

优选地，所述蔗糖的加入量为0g。