[发明专利]一种特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列及其应用

权利要求书

1.一种特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列，其特征在于该序列为IRS1-SgRNA1，IRS1-SgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.权利要求1所述的特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列在敲除猪IRS1基因中的应用，具体如下：

一、在猪IRS1基因的sgRNA导向序列的5’端加上CACC得到正向寡核苷酸；同时根据导向序列获得得其对应的DNA互补链，并且再起5’端加上AAAC得到反向寡核苷酸；分别合成上述正向寡核苷酸和反向寡核苷酸，将合成的正向寡核苷酸和反向寡核苷酸变性，退火，形成双链；

二、将步骤一制得的双链DNA与CRISPR/Cas9载体连接，得到重组敲除表达载体；

三、将步骤二制得的重组敲除表达载体转染细胞，筛选稳定转染细胞，得到成功敲除IGFBP3基因的细胞。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于步骤二中所述的CRISPR/Cas9载体为pX330载体。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于步骤三中所述转染细胞的方法为脂质体转染法。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于步骤三中所述筛选所用药物为嘌呤霉素。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于步骤三中所述的细胞为猪成纤维细胞。

7.权利要求1所述的特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列在特异识别和靶向修饰猪IRS1基因中的应用。

8.权利要求1所述的特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列在构建猪IRS1基因突变库中的应用。