[发明专利]环介导等温扩增法检测解脲脲原体的引物组及试剂盒在审
| 申请号： | 201710481631.3 | 申请日： | 2017-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN109112221A | 公开（公告）日： | 2019-01-01 |
| 发明（设计）人： | 王庆西;汪运山;杨炜华;伦恒忠 | 申请（专利权）人： | 济南市中心医院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 薛鹏喜 |
| 地址： | 250013 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 解脲脲原体 试剂盒 引物组 环介导等温扩增法 检测 特异性内引物 特异性外引物 阳性对照管 阴性对照管 快速诊断 区域设计 超纯水 反应管 环引物 筛查 无菌 灵敏 | ||
1.一种环介导等温扩增法检测解脲脲原体的引物组，其特征在于，包括：特异性外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；特异性外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；特异性内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；特异性内引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；环引物LB，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。
2.权利要求1所述的引物组在制备检测解脲脲原体的试剂盒或芯片中的用途。
3.一种检测解脲脲原体的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包含权利要求1所述的引物组。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，特异性外引物F3的含量为5pmol，特异性外引物B3的含量为5pmol，特异性内引物FIP的含量为40pmol，特异性内引物BIP的含量为40pmol，环引物LB的含量为20pmol。
5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：反应缓冲液、BstDNA聚合酶、显色液、无菌超纯水。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液中含有：400mM Tris-HCl(pH 8.8)、20mM KCl、16mM MgSO4、20mM(HN4)2SO4、0.2％Tween20、1.6M甜菜碱和2.8mMdNTPs。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述Bst DNA聚合酶的活性含量为160单位。
8.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液为锰离子鳌和型钙黄绿素。
9.一种非诊断目的的检测解脲脲原体的方法，其特征在于，步骤如下：
向反应液中加入待检DNA，混匀，同时设阴性对照和阳性对照，阴性对照中加入无菌超纯水，阳性对照中加入Uu DNA，将反应管置水浴锅中进行扩增，扩增条件为：60-65℃水浴，恒温反应30-40min，观察颜色变化；若反应液变为绿色，则为阳性结果；反应液不变色仍为淡橙色，则为阴性结果；
所述反应液中含有权利要求1所述的引物组。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述反应液还含有：反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、显色液和无菌超纯水。
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