[发明专利]一种检测禽白细胞介素4含量的方法及其专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测禽白细胞介素4含量的方法及其专用试剂盒。

背景技术

白细胞介素4(Interleukin 4，IL-4)是20世纪80年代初发现的，具有多种免疫学调节功能的细胞因子，对B细胞、T细胞等免疫细胞以及造血细胞等非免疫细胞均有免疫调节作用，可通过与多种类型细胞相互作用来调节宿主的免疫应答。2004年，单拷贝的功能性鸡白细胞介素4(chicken Interleukin 4,chIL-4)基因被发现，其mRNA基因序列全长为411bp，前体是137肽，其中包括25个氨基酸残基组成的信号肽，分泌的成熟的chIL-4有112个氨基酸残基，含3个分子内二硫键和2个可能的N端糖基化位点。

目前，已有在蛋白水平上检测人和小鼠IL-4的商品化试剂盒，但是由于chIL-4与人和小鼠IL-4的同源性仅分别为22.48％和21.23％，所以目前国内，无论是在学术研究还是临床疾病分析中主要还是以荧光定量PCR检测chIL-4的相对含量。但由于mRNA水平与蛋白水平并不呈绝对的线性关系，所以应用荧光定量PCR并不能反应出chIL-4的实际水平，故其并不能作为一个检测chIL-4蛋白量的实验技术而应用，同时荧光定量PCR技术操作繁琐，对专业技能要求较高且价格昂贵，不宜用于生产实际。因此，建立针对chIL-4在蛋白水平上的检测方法，将有助于评价chIL-4在机体内的动态变化水平，对于了解禽类传染性疾病的发生、发展、转归情况及机体保护性免疫反应的动态规律具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供抗chIL-4的单克隆抗体。

本发明提供的抗chIL-4的单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No.13838的杂交瘤细胞株1G11-7F-9E-6B和保藏号为CGMCC No.13839的杂交瘤细胞株2E5-G7-10C-7E分泌的。将保藏号为CGMCC No.13838的杂交瘤细胞株1G11-7F-9E-6B分泌的抗chIL-4的单克隆抗体命名为1G11-7F-9E-6B抗体，将保藏号为CGMCC No.13839的杂交瘤细胞株2E5-G7-10C-7E分泌的抗chIL-4的单克隆抗体命名为2E5-G7-10C-7E抗体。

本发明的第二个目的是提供分泌抗chIL-4的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明提供的分泌抗chIL-4的单克隆抗体的杂交瘤细胞株为1G11-7F-9E-6B和2E5-G7-10C-7E。杂交瘤细胞株1G11-7F-9E-6B的分类命名为杂交瘤细胞系(小鼠来源)，该杂交瘤细胞株已于2017年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.13838。

杂交瘤细胞株2E5-G7-10C-7E的分类命名为杂交瘤细胞系(小鼠来源)，该杂交瘤细胞株已于2017年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.13839。

本发明的第三个目的是提供一种检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的酶联免疫试剂盒。

本发明提供的检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的酶联免疫试剂盒包括上述1G11-7F-9E-6B抗体和/或2E5-G7-10C-7E抗体。

上述酶联免疫试剂盒还包括chIL-4标准品；所述chIL-4标准品是通过将核苷酸序列如序列表中序列1所示的chIL-4基因在原核细胞中进行表达获得的。

所述酶联免疫试剂盒中还包括如下中的至少一种：酶标板、包被缓冲液、洗涤缓冲液、抗体稀释液、封闭液、辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP标记的链霉亲和素)、显色液和终止液。

本发明的第四个目的是提供上述抗chIL-4的单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株或上述酶联免疫试剂盒的新用途。

本发明提供了上述抗chIL-4的单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株或上述酶联免疫试剂盒在检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量中的应用。

上述抗chIL-4的单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株在制备检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的试剂或胶体金试纸条或试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的第五个目的是提供一种检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的方法。