[发明专利]一种检测禽白细胞介素4含量的方法及其专用试剂盒

权利要求书

1.抗chIL-4的单克隆抗体，是由保藏号为CGMCC No.13838的杂交瘤细胞株1G11-7F-9E-6B分泌的。

2.抗chIL-4的单克隆抗体，是由保藏号为CGMCC No.13839的杂交瘤细胞株2E5-G7-10C-7E分泌的。

3.一株分泌抗chIL-4的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1G11-7F-9E-6B，其保藏号为CGMCC No.13838。

4.一株分泌抗chIL-4的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E5-G7-10C-7E，其保藏号为CGMCC No.13839。

5.一种检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的酶联免疫试剂盒，其包括权利要求1所述的单克隆抗体和/或权利要求2所述的单克隆抗体。

6.权利要求1或2所述的单克隆抗体或权利要求3或4所述的杂交瘤细胞株或权利要求5所述的酶联免疫试剂盒在检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量中的应用；

或，权利要求1或2所述的单克隆抗体或权利要求3或4所述的杂交瘤细胞株在制备检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的试剂或胶体金试纸条或试剂盒中的应用。

7.一种检测或辅助检测待测样品中chIL-4含量的方法，是以权利要求1所述的单克隆抗体为包被抗体、权利要求2所述的单克隆抗体为检测抗体的双抗体夹心ELISA检测方法。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

(1)将权利要求1所述的单克隆抗体包被到酶标板上，洗涤；

(2)封闭(1)得到的酶标板，洗涤；

(3)向(2)得到的酶标板中加入chIL-4标准品或待测样品，孵育，洗涤；

(4)向(3)得到的酶标板中加入生物素化的权利要求2所述的单克隆抗体，孵育，洗涤；

(5)向(4)得到的酶标板中加入HRP标记的链霉亲和素，孵育，洗涤；

(6)向(5)得到的酶标板中加入底物显色，显色后加入终止液终止反应；

(7)用酶标仪检测加入chIL-4标准品的各孔的吸光度值，以chIL-4标准品浓度为横坐标、以酶标仪的读数为纵坐标绘制标准曲线；

(8)用酶标仪检测加入待测样品的孔的吸光度值，将吸光度值代入所述标准曲线，即得待测样品中chIL-4的浓度。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：

或，所述步骤(1)中，用磷酸盐缓冲液将权利要求1所述的单克隆抗体稀释后包被到酶标板上；

或，所述步骤(2)中，用脱脂奶溶液封闭(1)得到的酶标板；

或，所述步骤(3)中，用BSA溶液将chIL-4标准品稀释后加入酶标板中；

或，所述步骤(4)中，用BSA溶液将生物素化的权利要求2所述的单克隆抗体稀释至1.0μg/mL后加入酶标板中。

10.根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于：

所述步骤(1)中，所述抗体的浓度稀释为5μg/mL；所述包被的条件为4℃包被12h；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M，pH为6.0；

所述步骤(2)中，所述脱脂奶溶液的质量分数为5％；所述封闭的条件为4℃封闭12h；

所述BSA溶液的质量分数为1％；

所述步骤(3)中，所述孵育时间为1h；

所述步骤(4)中，所述孵育时间为2h；

所述步骤(5)中，所述孵育时间为15min；

所述用酶标仪检测吸光度值时的波长为450nm；

所述洗涤的次数为6次。