[发明专利]高效合成融合基因的方法及其应用在审
| 申请号： | 201710476786.8 | 申请日： | 2017-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN107287190A | 公开（公告）日： | 2017-10-24 |
| 发明（设计）人： | 谢昌平 | 申请（专利权）人： | 上海恩即斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京酷爱智慧知识产权代理有限公司11514 | 代理人： | 孟凡臣 |
| 地址： | 201203 上海市徐汇区自由贸易试*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高效 合成 融合 基因 方法 及其 应用 | ||
1.一种合成融合基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：分析待合成融合的基因序列，确定适合进行退火的区域；
S2：在所述适合进行退火的区域中选择合适长度的片段，进行各个片段的引物的设计与合成；
S3：混合合成的各个片段的引物，然后进行重叠PCR，将各个片段的引物拼接成，得到拼接产物。
2.根据权利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S1中，所述确定适合进行退火的区域是根据退火温度确定，所述退火温度为55℃～60℃。
3.根据权利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S1中，所述确定适合进行退火的区域是根据Primer3、Oligo或DNAStar工具进行确定。
4.根据权利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S2中，所述合适长度为200～800bp，且保证各片段之间的重叠区域为所述适合进行退火的区域。
5.根据权利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
在所述S3后，还包括S4：将所述拼接产物进行克隆，测序验证序列正确性。
6.根据权利要求1所述的合成融合基因的方法，其特征在于：
所述S3中，所述重叠PCR采用Life technologies公司的Platinum Hifi聚合酶及反应体系。
7.权利要求1-6任一项所述的合成融合基因的方法在高通量测序基因诊断中融合基因的标准品构建中的应用。
8.权利要求1-6任一项所述的合成融合基因的方法在基因定量分析中融合基因的标准品构建中的应用。
9.权利要求1-6任一项所述的合成融合基因的方法在工程抗体尤其是双特异性抗体构建中的应用。
10.权利要求1-6任一项所述的合成融合基因的方法在多个编码序列的融合基因表达载体构建或调控元件与编码序列的融合基因载体构建中的应用。
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