[发明专利]一种植物乳杆菌来源的苯丙酮酸还原酶及应用

权利要求书

1.一种苯丙酮酸还原酶，其特征在于，氨基酸序列如(a)或(b)所示：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

(b)在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有苯丙酮酸还原活性的由(a)衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的苯丙酮酸还原酶的基因。

3.一种基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主，表达SEQ ID NO.2所示的苯丙酮酸还原酶。

4.根据权利要求3所述的基因工程菌，其特征在于，以pET-28a(+)为载体。

5.根据权利要求3或4所述的基因工程菌，其特征在于，宿主为大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。

6.构建权利要求5所述基因工程菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将SEQ ID NO.1所示基因片段与与pUCm-T连接后转化至E.coli JM109，获得重组质粒命名为pUCm-T-lpppr；(2)将pUCm-T-lpppr与pET-28a(+)质粒均用Nde I和Not I进行双酶切，在T4DNA连接酶的作用下进行连接，得到重组质粒pET-28a(+)-lpppr；(3)将pET-28a(+)-lpppr转化入E.coli BL21(DE3)。

7.一种产苯丙酮酸还原酶的方法，其特征在于，将表达权利要求1所述苯丙酮酸还原酶的基因工程菌接种至培养基中，培养至OD₆₀₀为0.6～0.8，加入终浓度为0.4-0.6mM的IPTG，于18～22℃诱导表达7～9h。

8.一种应用权利要求1所述苯丙酮酸还原酶制备D-苯乳酸的方法，其特征在于，是将苯丙酮酸还原酶以16～25U/mmol苯丙酮酸的添加量加入至含葡萄糖和苯丙酮酸的反应体系中，所述苯丙酮酸和葡萄糖的质量比为1：0.8～1。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述苯丙酮酸是以酶液、酶粉或基因工程菌的形式参与反应。

10.权利要求3所述的基因工程菌在食品、生物、医药领域的应用。