[发明专利]金银花克隆LjHQT基因、克隆方法、植物表达载体及用途在审
| 申请号： | 201710474027.8 | 申请日： | 2017-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN107099543A | 公开（公告）日： | 2017-08-29 |
| 发明（设计）人： | 蒲高斌;魏丽;李佳;刘谦;张永清 | 申请（专利权）人： | 山东中医药大学 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N9/10;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司11429 | 代理人： | 张祥明 |
| 地址： | 250355 山东省济南市长清区*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 金银花 克隆 ljhqt 基因 方法 植物 表达 载体 用途 | ||
1.金银花克隆LjHQT基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述基因的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取金银花RNA，反转录获得cDNA；
(2)参照其他植物HQT保守区设计简并引物，以cDNA为模板，进行PCR扩增，获得核心序列；简并引物如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；
(3)通过RACE方法从核心序列克隆全长cDNA序列，即为LjHQT基因。
3.根据权利要求2所述的克隆方法，其特征在于，步骤(1)中，RNA的提取对象为金银花幼叶片。
4.根据权利要求2所述的克隆方法，其特征在于，步骤(2)中，所述其他植物为马铃薯、番茄、烟草或咖啡。
5.根据权利要求2所述的克隆方法，其特征在于，步骤(2)中PCR扩增使用Ex Taq酶，扩增程序如下：95℃变性4分钟后，依次进行94℃30秒、55℃40秒、72℃90秒30个循环，最后于72℃延伸15分钟。
6.根据权利要求2所述的克隆方法，其特征在于，步骤(2)中所得核心序列为860bp。
7.根据权利要求2所述的克隆方法，其特征在于，步骤(3)所得LjHQT基因全长1,621bp，其中包括1,320bp的编码区、209bp的5’非翻译区和一个包含18个多聚腺苷酸尾的92bp 3’非翻译区，与其他植物HQT的同源性介于42～71％之间。
8.一种利用权利要求1所述基因构建的植物表达载体。
9.根据权利要求8所述的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体是利用Gateway技术构建得到的。
10.权利要求1所述基因的用途，其特征在于，利用上述基因构建植物表达载体，通过遗传转化获得抗病性转基因植物。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东中医药大学，未经山东中医药大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710474027.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
