[发明专利]兜兰新品种“优优兜兰”组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程的植物组织培养繁育方法，特别是涉及一种兜兰新品种“优优兜兰”的组培快繁方法。

背景技术

兰科植物是自然界最大的家族之一，是有花植物中最为庞大和进化水平极高的类群之一，在被子植物当中仅次于菊科和禾本科位于第三大科。全世界的兰科植物约有700属，20000-30000种，广泛分布于从温带、亚热带到热带的广大区域。我国已发现并定名的兰花约170余属1300余种 ，其中2/3为附生兰，1/3为地生兰 。目前，整个兰科植物已被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅰ或Ⅱ。贵州是一个喀斯特地貌广泛发育的高原省份，在地理环境上属于亚热带气候，具有独特复杂的地形地貌、植被类型多样和良好的水热条件，适宜多种植物繁衍生息，同时也孕育了较丰富的兰花资源。贵州省境内分布有兰科植物约76属320余种，包括大量的变种及品种。

兜兰属（Paphiopedilum Pfitz）植物是兰科植物最具观赏价值的物种之一，兜兰由于独特的花朵造型、绚丽的花朵色彩、持久的观赏花期而具有极高的观赏价值，全世界广泛栽培。中国是兜兰属植物的主要产地之一，是世界兜兰属的重要分布地和许多新种的模式产地，有18种（Chen，1999）。自20世纪80年代初，我国的兜兰属植物开始出现在欧美市场；80年代末至90年代中期是我国野生兜兰属植物贸易的高峰，兜兰市场迅速扩大，不计其数的植株出现在一些欧美种植场和花卉市场。

兜兰新品种“优优”（ Paphiopedilum GZSLKY Youyou），于 2016年 08 月 17日在英国皇家园艺学会（Royal Horticultural Society简称RHS）登陆，并获得了兰花新品种登记证书。英国皇家园艺学会是世界上唯一的、权威的兰花新品种登录机构，该机构只登录首次育成的兰花属间和种间杂交种。“优优兜兰”是以长瓣兜兰（Paphiopedilum dianthum）为母本， 小叶兜兰（Paphiopedilum barbigerum）为父本，进行杂交育种方法选育而成，

由于“优优兜兰”胚发育不完全，在自然状态下繁殖困难，存在种子萌发率极低，成苗率低，生长速度慢等缺点；传统的无性分株繁殖法，周期长，繁殖系数低，每年只能增殖1～3倍，常规繁殖难度大。因此如何运用植物生物促成方法快速繁殖“优优兜兰”已成为兰科植物保育及应用的重点课题。

兜兰属的杂交育种由于受种子萌发条件的限制，发展很缓慢，自从兰科植物无菌播种技术应用后，兜兰属植物杂交育种得到了快速发展。但“优优兜兰”属于兰科、兜兰属植物的新品种，其组培快繁方法尚处于摸索、处理阶段，“优优兜兰”种子极其微小，采用其它兜兰属的成熟的组培快繁育苗方法，导致败育率极高，甚至出现完全败育的状态。而兰花的培育周期又长，仅杂交、育苗期动辄就要1-3年。

所以研究一种败育率低、采用组培快繁方法、可实现批量工厂化育苗方法，就成为“优优兜兰”快速走向市场、满足人们需求的重要前提条件。

发明内容

为解决现有技术中“优优兜兰”因胚发育不完全，在自然状态下繁殖困难的技术问题，本发明提供一种败育率低，可以极大的提高繁殖系数的高效率试管繁殖方法，即兜兰新品种“优优兜兰”组培快繁方法。

兜兰新品种“优优兜兰”组培快繁方法，包括以下步骤：

A、人工杂交授粉：以长瓣兜兰为母本， 小叶兜兰为父本，选取生长健壮的长瓣兜兰母本及父本在开花时开展人工辅助授粉，授粉后370到390天，将发育至基本成熟而未开裂的果实作为外植体；

B、 无菌播种及原球茎萌发阶段：选用饱满的果实用酒精浸泡 ，置于升汞溶液中消毒，无菌水冲洗，用解剖刀切开果实，用接种针将褐色粉末种子接种到培养基上，培养80-100天，形成原球茎及芽混合体；

C、增殖分化培养阶段：为获得更多的种苗，将芽和原球茎混合组织接种在1/2MS添加6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、α-萘乙酸（NAA）培养基上，经140-160天培养，长成丛生带短根的小苗；

D、壮苗生根阶段：将长成的丛生植株分开，接种到1/4MS添加α-萘乙酸（NAA）的培养基上，直到长成具2-3条根、3-4片叶的完整植株。