[发明专利]一种PCR扩增冻干预存试剂及其制备方法在审
| 申请号： | 201710472385.5 | 申请日： | 2017-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN107177685A | 公开（公告）日： | 2017-09-19 |
| 发明（设计）人： | 韦玉军;李航;李静;苏军;吴远航 | 申请（专利权）人： | 安徽安龙基因医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙)33240 | 代理人： | 王桂名 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市庐阳*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 pcr 扩增 干预 试剂 及其 制备 方法 | ||
1.一种PCR扩增冻干预存试剂，其特征在于：包括以下组分：DNA聚合酶、Mg2+、dNTP、低温冻干保护剂。
2.根据权利要求1所述的一种PCR扩增冻干预存试剂，其特征在于：所述的DNA聚合酶的浓度为0.05U/ul，所述的Mg2+的浓度为4mM，所述的dNTP的浓度为0.4mM，所述的低温冻干保护剂的浓度为1.2-7mM。
3.根据权利要求1所述的一种PCR扩增冻干预存试剂，其特征在于：所述的低温冻干保护剂由以下组分组成：海藻糖4-25g、甘露糖醇1-7g、牛血清白蛋白1-7g、吐温0.1-0.25ml、Tris-HCl 2.5-5.0mmol、水49-50ml。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种PCR扩增冻干预存试剂的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
一、将DNA聚合酶、Mg2+、dNTP混合在一起，制备得到PCR反应体系混合液，再将PCR反应体系混合液与低温冻干保护剂混合均匀；
二、将混匀后的液体放入冷冻干燥箱中，进行预冻3-5h；
三、在-45℃—-55℃的条件下，进一步升华，保持冷冻干燥2-4h；
四、重复步骤三两次，得到最终的PCR扩增冻干预存试剂；
五、将PCR扩增冻干预存试剂分装进96孔板反应管中，使用时加ddH2O稀释即可。
5.根据权利要求4所述的一种PCR扩增冻干预存试剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤二中，冷冻温度为-45℃—-55℃。
6.根据权利要求4所述的一种PCR扩增冻干预存试剂的制备方法，其特征在于：步骤一中PCR反应体系混合液和低温冻干保护剂按照使用浓度比例为3.3-7.0：12.8-16.5。
7.根据权利要求4所述的一种PCR扩增冻干预存试剂的制备方法，其特征在于：步骤五中96孔板中的每个反应管使用时总反应体积为20μl。
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