[发明专利]一种表达鸭2型腺病毒fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸭2型腺病毒(DADV2)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。所述载体在pMD19T‑Simple载体TA克隆位点插入含有鸡痘病毒的早晚期启动子LP2EP2启动下的DADV2fiber2基因、P11启动子启动下的lacz基因，以及用于同源重组的鸡痘病毒的基因组复制非必须片段LTYB、RTYB。所述转移载体的构建方法，包括如下步骤：构建质粒pMD‑TYB；构建质粒pMD22；构建质粒pMD22‑lacz；构建中间载体pMD22‑TYB‑lacz；构建转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑DFB2；对所得转移载体pMD22‑TYB‑lacz‑DFB2进行效果验证。本发明构建的重组鸡痘病毒转移载体为研制高效的表达鸭2型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，主要涉及一种表达鸭2型腺病毒(DADV2)fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用。

背景技术

鸭2型腺病毒(Duck Adenovirus 2)属于腺病毒科禽腺病毒属，是直径为70-90nm的线状双股DNA病毒，呈二十面体对称，其核心蛋白形成直径60-65nm的髓芯包裹在衣壳内，衣壳由252个壳粒组成，其中有240个为六邻体，12个则是五邻体基底，每个基底结合着2根纤维突起，这两个纤维突起为纤维蛋白，分别由fiber1和fiber2两个基因编码。纤维蛋白长度与病毒的抗原性有关，带有腺病毒型和亚属特异性抗原决定簇，是刺激宿主产生抗体的主要蛋白。其中fiber2可以诱导机体产生主要的型特异性中和抗体，对病毒的增殖、组装或扩散某个阶段是必要的，缺少fiber2将不能产生病毒粒子(Pablo Guardado-Calvo，Antonio L.Llamas-Saiz，Gavin C.Fox，Patrick Langlois and Mark J.VanRaaiji.Structure of the C-terminal head domain of the fowl adenovirus type1long fiber.[J]GenVirol，2007.88:2407-2416)。

鸭2型腺病毒病1977年首次在法国番鸭发生，由J.F.Bouquet等在番鸭种分离出来(J.F.Bouquet a,Y.Moreau,J.B.McFerranT.J.Connor，1982.Isolation andcharacterisation of an adenovirus isolated from muscovy ducks,AvianPathology,11:2,301-307)。鸭2型腺病毒主要能引起15-35天龄番鸭发病死亡，感染鸭只表现为精神萎靡、沉郁、消瘦、软脚、拉黄白色黏液稀粪，肝脏肿大苍白弥漫性黄白色针尖样坏死灶，胰腺白色坏死点的，脾脏肿大充血，肾脏肿大充血成黄色条索状。近年来在广东、浙江、福建等地番鸭、樱桃谷鸭养殖场频频爆发直接导致发病死亡率可高达10％-30％不等，给我国养鸭业造成较大的经济损失。

针对鸭2型腺病毒的疾病防治，目前并没有合适、有效的疫苗能对其进行免疫预防。有公司自家生产的组织灭活苗，虽然有一定的效果，但是使用组织苗只能作为一种应急的措施，并不能长期使用；也有公司采用细胞培养生产灭活疫苗，但效果也不佳；若是使用减毒疫苗，则会带来其他疾病的威胁，这就使得新型疫苗的研制尤为重要。因此需要开发更加有效的针对鸭2型腺病毒的疫苗。

足见，现有技术还有待完善。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种表达鸭2型腺病毒fiber2基因的重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法和应用，为研制高效的表达鸭2型腺病毒的重组鸡痘病毒基因工程活载体疫苗奠定基础。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：