[发明专利]一种脱细胞组织膜的制备方法

说明书

本发明涉及一种脱细胞组织膜的制备方法,包括的步骤：1）去除组织膜上脂肪组织，冲洗干净血渍；2）将中和清洗后的组织放入表面活性剂溶液中浸泡，以充分杂蛋白；3）放入蛋白复性溶液中浸泡；4）放入有机溶剂浸泡浸出油脂；5）放入碱溶液中浸泡，然后进行中和，使组织膜制备出孔隙；6）将组织膜放入含有交联剂的溶液中浸泡，进行交联；7）将上述步骤的得到的组织膜片，以湿性状态进行辐射灭菌；或者以冻干的形式进行辐射灭菌或EO灭菌。该方法可以将人源或动物源组织膜中细胞、脂质、杂蛋白等抗原物质去除干净，同时又保留细胞外基质并产生合适的孔隙。该方法制备的脱细胞组织膜可以作为组织工程支架、组织膜破损的修补材料以及创面敷料。

技术领域

本发明涉及一种脱细胞组织膜的制备方法,它是一种以哺乳动物组织膜为原料加工成医用材料的方法，该材料可用于组织工程支架、组织膜修补材料和医用敷料等的制备。

背景技术

脱细胞组织膜材料作为医疗器械在医疗领域广泛应用，例如生物补片、创面敷料、创口修复材料、组织修复支架等。用于制备脱细胞组织的原材料来源广泛，比如人体皮肤、动物皮肤、腹腔膜、体腔膜、肌腱、小肠粘膜、羊膜、血管、心包膜等。脱细胞组织膜制备大致方法是将新鲜的组织通过物理、化学或者生物的方法脱除组织的细胞成分（如DNA、蛋白质、多糖），降低材料的免疫原性，保留下组织的胞外基质，主要由胶原、氨基聚糖、蛋白聚糖、弹性蛋白等组成，对细胞组织起支持、保护、提供营养、细胞分化、细胞运动迁移、细胞识别、细胞黏着和通信联络等作用，甚至有报道称其中可以保留一定含量的生长因子，如血管内皮生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子和成纤维细胞生长因子，使其在组织的修复和重建过程中发挥重要作用。

脱细胞组织制备方法有很多种。中国专利CN 103191466 B公开的脱细胞组织操作方法简单，但其中组织保存步骤所需时间长达1～12个月，导致整个加工艺耗时太长。CN103432627 B采用碱泡、核糖核酸酶消化、α-半乳糖苷酶、病毒灭活、灭菌等步骤，能很好地去除细胞成分和α-Gal抗原，但其中的核糖核酸酶和α-半乳糖苷酶等酶制剂价格昂贵，处理起来成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种脱细胞组织膜的制备方法，采用常规的一些试剂材料，经简单的加工步骤得到脱细胞组织。本加工工艺具有抗原去除彻底，加工周期短的特点，所用试剂价格便宜易获得，组织结构破坏小，具有有利于组织细胞生长的孔隙，有助于提升细胞贴附生长，在临床上有利于组织再生。

本发明提供的脱细胞组织膜的制备方法具体包括以下步骤：

1)组织修剪：去除组织膜上脂肪组织，冲洗干净血渍。

2)碱液浸泡：将修剪后的组织放入碱液浸泡裂解细胞，然后取出用酸中和后清洗干净。

3)表面活性剂溶液浸泡：将中和清洗后的组织放入表面活性剂溶液中，以充分浸出杂蛋白。

4)蛋白复性溶液浸泡：将组织膜放入蛋白复性溶液中浸泡进一步去除杂蛋白，然后清洗干净。

5)有机溶剂浸泡：将组织膜放入有机溶剂中浸泡去除脂质，然后通过水或亲水性有机溶剂与水组合清洗掉有机溶剂。

6)组织孔隙制备：将组织膜放入碱溶液中浸泡以产生空隙，然后进行中和。

7)交联：利用交联剂与抗原位点的氨基、羟基、羟基等发生反应，进一步降低脱细胞组织的抗原性，或提升脱细胞组织的降解周期，或提升脱细胞组织的拉伸强度。

8)灭菌：将上述步骤的得到的组织膜片，以（通常的方法）湿性状态进行辐射灭菌；或者以冻干的形式（通常的方法）进行辐射灭菌或EO灭菌。

本方法没有使用一些价格昂贵的酶去除细胞和α-GAL抗原，大大降低成本，也可达到很好的去除效果。

步骤1)中所采用的组织包括来人类、哺乳动物（猪、牛、羊等）的真皮组织、血管、消化腔道、脏器膜、体腔膜等。