[发明专利]一种脱细胞组织膜的制备方法

权利要求书

1.一种脱细胞组织膜的制备方法，其特征在于它是经过如下的步骤：

(1) 取膜：取出6个月龄牛的离体腹腔膜，进行清洗；

(2)组织修剪：以腹腔膜为原材料，用剪刀剪除脂肪组织残留组织碎片，用纯化水冲洗干净血渍；

(3)碱液浸泡：取上述清洗后的膜组织称取10g，加入100mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液中浸泡1h；取上述步骤浸泡后的膜组织加入质量浓度为4%的醋酸溶液中浸泡10min，然后将膜取放入纯化水清洗3次，每次5min；

(4)表面活性剂溶液浸泡：表面活性剂溶液的配方为：1%十二烷基硫酸钠、50mM醋酸钠、20mM氯化钾、10mM氯化镁、10mM氯化钠、5mM的β-巯基乙醇；

用醋酸调节pH值至7.0；将上一步的膜放入100mL 表面活性剂溶液中，浸泡2d，浸泡温度为26℃；然后更换浸泡液，再浸泡2d，浸泡温度为26℃；将膜取放入纯化水清洗3次，每次5min；

(5)盐酸胍溶液浸泡：配制2M的盐酸胍水溶液100mL，将上一步骤的膜放盐酸胍溶液中，于25℃条件下浸泡2h，取出膜，放入纯化水清洗3次，每次5min；

(6)脱脂处理:将上述步骤膜放入50%乙醇中浸泡1h；放入60%乙醇中浸泡1h；放入70%乙醇中浸泡1h；放入80%乙醇中浸泡1h；放入90%乙醇中浸泡1h；放入100%乙醇中浸泡1h；然后放入石油醚中浸泡2h；再更换100%乙醇浸泡1h；更换90%乙醇浸泡1h；更换80%乙醇浸泡1h；更换70%乙醇浸泡1h；将膜取放入纯化水清洗3次，每次5min；

(7)组织孔隙处理：将制备的膜放入1M的氢氧化钠，浸泡时间为1h；

(8)交联：取上面浸泡后的膜组织加入体积浓度为1％乙醛的磷酸盐缓冲溶液中进行，pH=7.0，反应温度为25℃，交联24h；将膜取出放入纯化水清洗3次，每次5min；

(9)冻干与灭菌：将上述得到的组织膜在-40℃～-5℃范围内冷冻真空干燥，冻干结束后将膜放入透析纸袋进行EO灭菌。