[发明专利]一种纯化分离西曲瑞克的方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽药物制备技术领域，具体涉及一种纯化分离西曲瑞克的方法。

背景技术

西曲瑞克是一种合成的10肽，是一种有效的黄体酮释放激素抑制素(LHRH)受体拮抗剂，它能控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕。并可用于治疗乳腺癌和妇科癌，子宫内膜异位症、性早熟、子宫肌瘤、卵巢雄激素过多和经前综合症。由于西曲瑞克的自身物理性质而易被胃肠道中的酵素分解破坏，不能通过口服使用，因此常作注射用西曲瑞克制剂，通过皮下或肌肉注射吸收，迅速发挥作用。

西曲瑞克的序列如下：

Ac-D-2-Nal-D-4Cpa-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2

目前尚未有西曲瑞克纯化方法的专利或文献，但从西曲瑞克的质量标准看，毒性杂质：脱酰胺西曲瑞克和乙酰化西曲瑞克杂质是产品纯度控制的关键点。

在生产西曲瑞克的过程中，我们也发现脱酰胺西曲瑞克杂质和乙酰化西曲瑞克杂质比较难分离，严重影响产品收率。

发明内容

本发明的目的是提供一种纯化分离西曲瑞克的方法，以解决现有技术的不足。

本发明采用以下技术方案：

一种纯化分离西曲瑞克的方法，包括如下步骤：

步骤1、将西曲瑞克粗品溶解于乙腈水溶液中，超声处理，滤膜过滤，得到粗品溶液待用；

步骤2、使用高效液相色谱法对粗品溶液进行分离纯化：色谱柱为反相色谱柱，流动相A为磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈；用流动相A平衡反相色谱柱后，将粗品溶液载入到反相色谱柱中，采用梯度洗脱分离纯化；

步骤3、将分离纯化后，纯度达99.5％以上目的肽溶液于水温不超过38℃下进行减压旋蒸浓缩，得到浓缩液待用；

步骤4、用醋酸水溶液平衡反相色谱柱后，将浓缩液上样至反相色谱柱中，用醋酸水溶液/乙腈体系进行转盐；

步骤5、转好醋酸盐且纯度99.5％以上目的肽溶液于水温不超过38℃下进行减压旋蒸浓缩，冷冻干燥，得到粉末状西曲瑞克产品。

进一步地，步骤2流动相A为质量浓度0.03wt％～6.0wt％的磷酸二氢钠水溶液，并用磷酸调pH至2.5～4.5。

进一步地，步骤2流动相A为质量浓度0.2wt％～0.8wt％的磷酸二氢钠水溶液，并用磷酸调pH至3.0～4.0。

进一步地，步骤2按体积分数设置流动相梯度，0到60分钟A：B由80～65：20～35到40～25：60～75。

进一步地，步骤1中西曲瑞克粗品纯度不低于80％，脱酰胺西曲瑞克杂质含量不高于5％，乙酰化西曲瑞克杂质含量不高于1.5％。

进一步地，步骤1中乙腈水溶液为20-40v/v％乙腈水溶液。

进一步地，步骤1中用孔径为0.45μm滤膜过滤。

进一步地，反相色谱柱内的固定相为C18或C8反相填料。

进一步地，步骤4用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液平衡反相色谱柱后，将浓缩液上样至反相色谱柱中，用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液冲洗柱子3个柱体积；再用50％的乙腈和50％的0.05～1.0v/v％醋酸水溶液洗脱，收集洗脱液即转好醋酸盐的肽溶液。

进一步地，平衡、洗脱、冲洗反相色谱柱的流速根据反相色谱柱的规格进行设定，2*25cm反相色谱柱采用5～20ml/min的流速，其它规格的反相色谱柱流速线性放大。

本发明的有益效果：

本发明采用反相C18或C8柱、磷酸二氢钠缓冲体系(pH＝2.5-4.5)进行纯化分离。此纯化方法能有效分离西曲瑞克中的毒性杂质：脱酰胺杂质和乙酰化西曲瑞克杂质。本发明可有效解决现有技术中由于脱酰胺杂质和乙酰化西曲瑞克杂质未有效分离而存在收率低的难题，大大提高西曲瑞克的纯化收率，收率高达45％，降低生产成本。且所得西曲瑞克产物纯度高达99.5％。本发明方法只需要一次过柱即可同时分离西曲瑞克产品中的毒性杂质：脱酰胺西曲瑞克和乙酰西曲瑞克杂质，控制杂质含量小于0.1％，有效提高西曲瑞克产品的安全性。获得的西曲瑞克不仅纯度高，而且收率好，达到工业化生成的要求，具有良好的经济价值和广泛的应用前景。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本发明，但并不用来限定本发明的实施范围。

一种纯化分离西曲瑞克的方法，包括如下步骤：