[发明专利]一种纯化分离西曲瑞克的方法

权利要求书

1.一种纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、将西曲瑞克粗品溶解于乙腈水溶液中，超声处理，滤膜过滤，得到粗品溶液待用；

步骤2、使用高效液相色谱法对粗品溶液进行分离纯化：色谱柱为反相色谱柱，流动相A为磷酸二氢钠水溶液，流动相B为乙腈；用流动相A平衡反相色谱柱后，将粗品溶液载入到反相色谱柱中，采用梯度洗脱分离纯化；

步骤3、将分离纯化后，纯度达99.5％以上目的肽溶液于水温不超过38℃下进行减压旋蒸浓缩，得到浓缩液待用；

步骤4、用醋酸水溶液平衡反相色谱柱后，将浓缩液上样至反相色谱柱中，用醋酸水溶液/乙腈体系进行转盐；

步骤5、转好醋酸盐且纯度99.5％以上目的肽溶液于水温不超过38℃下进行减压旋蒸浓缩，冷冻干燥，得到粉末状西曲瑞克产品。

2.根据权利要求1所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤2流动相A为质量浓度0.03wt％～6.0wt％的磷酸二氢钠水溶液，并用磷酸调pH至2.5～4.5。

3.根据权利要求1所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤2流动相A为质量浓度0.2wt％～0.8wt％的磷酸二氢钠水溶液，并用磷酸调pH至3.0～4.0。

4.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤2按体积分数设置流动相梯度，0到60分钟A：B由80～65：20～35到40～25：60～75。

5.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤1中西曲瑞克粗品纯度不低于80％，脱酰胺西曲瑞克杂质含量不高于5％，乙酰化西曲瑞克杂质含量不高于1.5％。

6.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤1中乙腈水溶液为20-40v/v％乙腈水溶液。

7.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤1中用孔径为0.45μm滤膜过滤。

8.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，反相色谱柱内的固定相为C18或C8反相填料。

9.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，步骤4用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液平衡反相色谱柱后，将浓缩液上样至反相色谱柱中，用0.05～1.0v/v％醋酸水溶液冲洗柱子3个柱体积；再用50％的乙腈和50％的0.05～1.0v/v％醋酸水溶液洗脱，收集洗脱液即转好醋酸盐的肽溶液。

10.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离西曲瑞克的方法，其特征在于，平衡、洗脱、冲洗反相色谱柱的流速根据反相色谱柱的规格进行设定，2*25cm反相色谱柱采用5～20ml/min的流速，其它规格的反相色谱柱流速线性放大。