[发明专利]猪流行性腹泻病毒荧光RPA检测方法有效
| 申请号： | 201710465195.0 | 申请日： | 2017-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN107699635B | 公开（公告）日： | 2021-08-10 |
| 发明（设计）人： | 吕继洲;袁向芬;范燕茹;吴绍强;冯春燕 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京秉文同创知识产权代理事务所(普通合伙) 11859 | 代理人： | 张文武;孙富利 |
| 地址： | 100176 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 流行性 腹泻 病毒 荧光 rpa 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种通过重组酶聚合酶扩增技术检测猪流行性腹泻病毒M基因的引物和探针组合在制备检测猪流行性腹泻病毒M基因的试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物的正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示；
通过所述重组酶聚合酶扩增技术检测猪流行性腹泻病毒M基因的方法为，提取待测样品的DNA作为模板，或提取待测样品的总RNA，将反转录得到的cDNA作为模板，利用所述的引物和探针组合进行快速扩增及实时荧光检测，如果得到明显的扩增曲线，则证明待测样品含有猪流行性腹泻病毒M基因；
所述重组酶聚合酶扩增技术扩增的反应体系为50μL：向含有冻干酶粉的0.2mL TwistAmp Exo反应管中加入再水化缓冲液Rehydration Buffer29.5μL，去离子水12.5μL，10μmol/L的引物各2μL，10μmol/L的探针0.5μL，模板DNA 1μL，最后加入280mmol/L的醋酸镁溶液2.5μL； 扩增程序为：重组酶聚合酶扩增技术扩增检测仪或荧光定量PCR仪于39℃恒温反应20分钟，对于低拷贝数的模板 DNA，4min后拿出反应管再次混匀，离心3～5s，所述试剂盒的检测限值为101 copies/μL。
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