[发明专利]一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法

说明书

本发明公开了一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法，是由以下步骤获得的：副球菌接种至富集培养基，摇床培养，将所得菌体悬浮于无菌生理盐水中，得反硝化细菌菌悬液；绿色木霉接种至固体培养基上培养，无菌水洗涤，低温保存，得孢子悬浮液；将反硝化细菌菌悬液和孢子悬浮液接种至菌丝球培养基中摇床培养，得绿色木霉为载体固定化反硝化细菌的混合菌丝球。本发明的方法具有操作简便、培养时间短、可重复使用、沉降性能好的优点，制备的混合菌丝球可显著降低水体中的氮素含量，改善水质状况，使污水达到排放标准，且无亚硝酸盐积累，降低环境污染，对于大规模利用副球菌处理污水具有重要意义。

技术领域

本发明属于环境生物工程和水处理领域，具体涉及一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法。

背景技术

随着工农业生产的发展和人们生活水平的提高，含氮污染物的排放量迅速增加，水环境中氮污染的问题日趋严重，成为国际社会面临的一个重大问题。国内水体中氮的污染以硝态氮和亚硝态氮形式氮的污染最为严重，而生物除氮是去除水体中氮污染的最有效的方法之一。

生物脱氮技术通常有硝化工艺和反硝化工艺组成。硝化工艺以去除氨氮为主，虽然能把氨氮转化为硝酸盐，但是不能彻底将氮素从水体中去除。反硝化工艺则能从根本上消除氮素对环境的污染。反硝化细菌是反硝化作用发生的主体，然而，游离的反硝化细菌在污水处理的过程中存在诸多不足，可以考虑通过微生物固定化技术解决这一问题。

微生物固定化技术是将特选的微生物固定在选择的载体上，使其高度密集并保持生物活性，在适宜条件下能够快速、大量增殖的生物技术。这种技术应用于废水处理，有利于提高生物反应器内微生物（尤其是特殊功能的微生物）的浓度，有利于微生物抵抗不利环境的影响，有利于反应后的固液分离，缩短处理所需的时间。常见的固定化载体和包埋材料为聚乙烯醇、海藻酸钠、琼脂、明胶等。然而将反硝化细菌固定在这些化学载体上常会抑制菌体活性，一定程度上会影响到反硝化细菌处理污水脱氮的能力。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法，是由以下步骤获得的：

1）由斜面上取两环副球菌接种至富集培养基，摇床培养，培养液离心去除上清液，得菌体；将菌体悬浮于无菌生理盐水中，得反硝化细菌菌悬液；

本发明的副球菌（Paracoccussp.）购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），编号：CGMCCNo.13607。

2）由斜面上取两环绿色木霉接种至固体培养基上培养形成孢子，用无菌水洗涤孢子，低温保存，得孢子悬浮液；

本发明的绿色木霉（Trichodermaviride）购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所），编号：CGMCCNo.3.6619。

3）将反硝化细菌菌悬液和孢子悬浮液接种至菌丝球培养基中摇床培养，得绿色木霉为载体固定化反硝化细菌的混合菌丝球。

所述步骤1）中，无菌生理盐水的浓度为0.9%；菌体与无菌生理盐水的质量比为1：50-250。

所述步骤1）中，富集培养基的组成如下：KNO₃ 0.1-10g/L，蛋白胨0.1-20g/L，牛肉膏0.1-20g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.1-5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-5g/L，余量为水。