[发明专利]一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法

权利要求书

1.一种以绿色木霉为载体进行反硝化细菌固定化的方法，其特征在于，是由以下步骤获得的：

1）由斜面上取两环副球菌接种至富集培养基，摇床培养，培养液离心去除上清液，得菌体；将菌体悬浮于无菌生理盐水中，得反硝化细菌菌悬液；

2）由斜面上取两环绿色木霉接种至固体培养基上培养形成孢子，用无菌水洗涤孢子，低温保存，得孢子悬浮液；

3）将反硝化细菌菌悬液和孢子悬浮液接种至菌丝球培养基中摇床培养，得绿色木霉为载体固定化反硝化细菌的混合菌丝球；

所述副球菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，编号：CGMCCNo .13607。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中，无菌生理盐水的浓度为0.9%；菌体与无菌生理盐水的质量比为1：50-250。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中，富集培养基的组成如下：KNO₃ 0.1-10g/L，蛋白胨0.1-20g/L，牛肉膏0.1-20g/L，K₂HPO₄·3H₂O 0.1-5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-5g/L，余量为水。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中，摇床培养的转速为100-200r/min，培养温度为19-35℃，培养时间为12-72h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中，固体培养基为PDA琼脂培养基；培养温度为20-32℃，培养时间为3-15d；低温保存温度为2-6℃；孢子悬浮液的浓度为1.06×10⁵个/L-3.12×10⁵个/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中，摇床培养的转速为100-200r/min，培养温度为20-32℃，培养时间为2-7d。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3）中，所述菌丝球培养基的组成如下：葡萄糖10-20g/L，硝酸钾2-5g/L，K₂HPO₄·3H₂O0.5-3g/L，NH₄Cl1-3g/L，MgSO₄·7H₂O0.1-1.5g/L，余量为水。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于， 所述步骤3）中，反硝化细菌菌悬液的接种量为4-20%，V/V；所述孢子悬浮液的接种量为6.34×10⁵/L-7.92×10⁷个/L。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述混合菌丝球在污水中的接种量为4-15%，在15-35℃、pH值为6-10的条件下培养。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述污水中硝酸盐氮的浓度为500mg/L以下。