[发明专利]一种组织病理学的组织样本的处理方法

说明书

技术领域

本发明属于组织病理学样本处理技术领域，具体涉及一种组织病理学的组织样本的处理方法。

背景技术

组织病理学的组织样本的处理方法通常是将组织样本置于特定的化学试剂中，是组织样本的组织结构发生一定变化，便于观察组织病理特征。比如尸体解剖中涉及的石蜡渗透保存处理样本方法，该方法是将组织样本包埋在石蜡中，经固定、脱水、清洗、渗透等步骤。石蜡包埋染色制片是当前处理组织样本的基本技术，也是病理诊断方法学的基础。

现有组织样本处理技术需要经过处理包埋、切片、染色、封片等诸多步骤，包埋步骤通常是将离体组织样本从样品盒中取出，加入诸如固体石蜡包埋材料的模具中，得到包埋组织；切片步骤是将包埋组织置于切片机中切片，切片需要2-25微米厚的片；染色步骤是将得到的切片用特殊的染色剂染色处理，以便于镜下观察；封片步骤则是保护染色好的组织样本，防止污染，以便观察。

然而，上述过程包括诸多细节步骤，步骤繁琐且耗时长，现有组织样本处理技术人为操作，存在人为污染组织样本的风险；并且过程中需要使用到大量甲醛、二甲苯、氯化汞等挥发性有毒试剂，长期接触容易损害技术人员身体健康。

发明内容

本发明提供的一种组织病理学的组织样本的处理方法，解决了现有处理方法步骤繁琐且耗时长，存在人为污染组织样本的风险，也解决了长期接触挥发性有毒试剂带来的损害技术人员身体健康的问题。

本发明提供的一种组织病理学的组织样本的处理方法，包括以下步骤：

步骤1，对离体的组织样本进行固定、冲洗、脱水、透明、浸蜡包埋、切片操作，得到石蜡组织切片；

步骤2，染色

步骤2.1，采用脱蜡液对石蜡组织切片浸泡脱蜡10min，得到脱蜡切片；其中，脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯58-60份、甲基环己烷40-42份；

步骤2.2，依次用复水液A、复水液B、复水液C、复水液D、复水液E浸泡处理，然后用复水液F冲洗处理3min，得到复水切片；

其中，复水液A由二甲苯和无水乙醇按照1:1的体积比例混合而成，复水液A浸泡时间为5min；复水液B、复水液C、复水液D、复水液E依次是体积分数95％乙醇、70％乙醇、45％乙醇、30％乙醇，且复水液B、复水液C、复水液D、复水液E的溶剂均为0.01mol/L的柠檬酸钠溶液；复水液B-复水液E的浸泡时间均为3min；复水液F是ddH₂O；

步骤2.3，依次用染色液A浸泡复水切片3-5min，水冲洗15-20s，盐酸-乙醇溶液冲洗1-2s，水冲洗2-3s，饱和碳酸锂溶液冲洗15-20s，水冲洗直至切片变色，染色液B浸泡3-5min，水冲洗2-3s，复水液D冲洗5-10s、复水液C冲洗5-10s、复水液B冲洗5-10s，无水乙醇脱水，二甲苯透明，得到透明切片；

所述染色液A由以下重量份的组分混合而成：苏木精1份、硫酸铝钾15份、无水乙醇10份、氯化汞0.5份、氯化钠0.5-0.9份、去离子水200份；使用时每100ml染色液A加入5ml冰醋酸；

所述染色液B是将1g伊红溶解入100ml 95％乙醇中制备而成，使用时每100ml染色液A加入50μL冰醋酸；

步骤3，采用中性树脂对染色切片进行封片，完成对组织样本的处理。

优选的，上述组织病理学的组织样本的处理方法，所述脱蜡液由以下重量份的组分混合后制成：D-柠檬烯58份、甲基环己烷42份。

优选的，上述组织病理学的组织样本的处理方法，所述盐酸-乙醇溶液由0.5mL盐酸和99mL 75％酒精混合而成。

优选的，上述组织病理学的组织样本的处理方法，所述染色液A由以下重量份的组分混合而成：苏木精1份、硫酸铝钾15份、无水乙醇10份、氯化汞0.5份、氯化钠0.5份、去离子水200份。

优选的，上述组织病理学的组织样本的处理方法，所述染色液A按以下方法制备：先用去离子水加热溶解硫酸铝钾、氯化钠，得硫酸铝钾溶液，用无水乙醇溶解苏木精，得苏木精溶液；然后将硫酸铝钾溶液和苏木精溶液混合，煮沸1min，冷却20-30s，加入氯化汞，加热搅拌直至颜色变为紫红色，滤纸过滤后，每100ml染色液A加入5ml冰醋酸，备用。

与现有技术相比，本发明提供的一种组织病理学的组织样本的处理方法具有以下有益效果：