[发明专利]一种亚型Ph‑likeALL的检测方法

权利要求书

1.一种亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

1）分别配制乙醇溶液、预处理液、洗液和酶缓冲液，置2℃-8℃氮气条件储存；

2）荧光探针溶解：向探针管内加10~20μl水，加入150~200μl杂交液，超声溶解30~60s，得到探针溶液；

3）将骨髓细胞固化，涂抹于玻片上，经过预处理，制成涂片；所述固化为肝素化处理或经EDTA-醋酸钠处理；

4）将探针溶液预温到室温，漩涡混匀，离心2~3s，取5~15μl混匀的探针溶液滴加到杂交区域，盖上盖玻片，用封片胶密封；

5）设置程序：先70~80℃变性5~10分钟，然后 35~40℃杂交16~18h；

6）除去封片胶，置于考普林缸内的室温洗液中1~5min洗去盖玻片，取出涂片，用已预热至72~74℃的洗液漂洗1~3min，再用室温65~75%乙醇溶液漂洗1~3min，避光自然风干；

7）滴加复染液到杂交区域，盖上盖玻片，置-25~ -15℃暗处复染20分钟以上；所述复染液由以下重量份数的组分组成：革兰氏染色液5~7份，氯化镁1~3份，柠檬酸0.2~0.6份，荧光素0.5~0.7份，海藻酸钠0.1~0.3份；

8）使用物镜对样本进行扫描，确定样本是否有异质性。

2.根据权利要求1所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述乙醇溶液的体积分数为70~ 85%；所述预处理液为0.9~1.1mol/L的硫氰酸钠溶液；所述洗液由以下重量百分数的组分组成：氯化钠1.7~1.8%，柠檬酸钠0.8~1%，乙基苯基聚乙二醇0.2~0.4%，余量为水；所述酶缓冲液为0.009~0.011mol/L的稀盐酸。

3.根据权利要求1所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述荧光探针共12组，分别为ABL1，ABL2，CSF1R，PDGFRB， CRLF2，JAK2，EPOR，IL2RB，NTRK3，PTK2B，TSLP和 TYK2。

4.根据权利要求1所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述步骤2）荧光探针溶解还包括下列步骤：用移液枪冲洗探针管底部和管壁，振荡混匀20~40s，离心20~40s， 放35~40℃水浴保温溶解5~15分钟；重复上述过程2~3次，将配制好的探针溶液备用或分装冰冻避光保存。

5.根据权利要求1所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述步骤6）考普林缸还用于盛放预处理液、洗液和酶缓冲液，将所述洗液预热至72~74℃，将所述预处理液预热至75~85℃，将所述酶缓冲液预热至36~38℃。

6.根据权利要求1所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述步骤3）预处理包括如下步骤：a）将涂片60~70℃预热5~10min，用浸蜡脱蜡透明液脱蜡2次每次10~20min，用无水乙醇脱水2次每次3~5min；b）依次在85%乙醇、70%乙醇、纯化水中梯度复水，各0.5~2min，吸去残余溶液；c）放在已经预热到75~85℃的预处理液中保温20~40min，取出在纯化水中浸泡1~2min，吸去残余溶液；d）取40~60mg胃蛋白酶干粉溶解在已预热至36~38℃的酶缓冲液中，浸入消化20~30min；e）在纯化水中浸泡1~2min，依次在85%乙醇、70%乙醇、纯化水中梯度脱水，各0.5~2min，干燥备用。

7.根据权利要求8所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述步骤a）浸蜡脱蜡透明液为异构烷烃型。

8.根据权利要求8所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述步骤c）中所述预处理液为0.9~1.1mol/L的硫氰酸钠溶液。

9.根据权利要求8所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述酶缓冲液为0.01mol/L的稀盐酸，室温下的PH值为2.0±0.2。

10.根据权利要求1所述的亚型Ph-likeALL的检测方法，其特征在于，所述扫描的结果中有异质性的特征为有融合细胞。